Низкая цена
Всего 249a за скачивание одной диссертации
Скидки
75 диссертаций за 4900a по акции. Подробнее
О проекте

Электронная библиотека диссертаций — нашли диссертацию, посмотрели оглавление или любые страницы за 3 рубля за страницу, пополнили баланс и скачали диссертацию.

Я впервые на сайте

Отзывы о нас

Новые возможности монолитных пористых колонок в высокоэффективной жидкостной хроматографии : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.02

Год: 2005

Номер работы: 49340

Автор:

Стоимость работы: 249 e

Без учета скидки. Вы получаете файл формата pdf

Оглавление и несколько страниц
Бесплатно

Вы получаете первые страницы диссертации в формате txt

Читать онлайн
постранично
Платно

Просмотр 1 страницы = 3 руб



Оглавление диссертации:

Актуальность темы. Традиционно используемая в высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) колонка, представляет собой стальную, стеклянную или полимерную трубку, заполненную частицами сорбента. Наиболее важной характеристикой хроматографической колонки является ее эффективность, которая обратно пропорциональна размеру частиц и прямо пропорциональна длине колонки, а также зависит от однородности набивки колонки и скорости пропускания элюента. Обычно для заполнения колонок используют сорб

1.1. Предпосылки и история возникновения монолитных колонок Последние годы характеризуются бурным развитием биохимии и биотехнологии. Именно в этих областях использование высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для определения, разделения и очистки биомолекул, таких как пептиды, белки, олигонуклеотиды и др., имеет наиболее важное значение. Как правило, хроматографическое разделение биополимеров требует существенных временных затрат, в результате чего возможна нежелательная деструкци

Способы получения пористых монолитов

1. Органополимерные пористые монолиты («молдинг»-синтез) Полимеризация органических мономеров в «форме» in situ приводит к образованию непрерывного полимерного слоя [7, 15-20]. В качестве формы используют стальные, стеклянные, пластиковые (РЕЕК) колонки и капилляры различного диаметра и длины [21, 22]. Состав исходной реакционной смеси определяет свойства монолитной колонки. Классическая смесь состоит из 4-х частей органического мономера (или смеси мономеров), 6-ти частей смеси алифатических

Как правило, чем выше температура полимеризации, тем меньше размер пор. Установлено, что это соблюдается при получении сополимеров ГМА15 ЭДМА и СТ-ДВБ в цилиндрических колонках. Действительно, при изменении только одного параметра - температуры - диаметр пор изменяется на 2 порядка. Это сопровождается изменением общего объема маленьких пор и, следовательно, изменением удельной площади поверхности. Влияние температуры полимеризации на пористые свойства полимера можно объяснить кинетикой этого

Пороген - это смесь алифатических или циклических спиртов различного состава. Выделение фазы сшитых ядер предшествует образованию макропористой структуры. Образование твердого полимера происходит из-за его ограниченной растворимости в полимеризационной смеси. Ограниченная растворимость вызвана 2-мя факторами - критической молекулярной массой олигомера, растворяющегося в данном растворителе, и сшивкой. Влияние термодинамических качеств порогена на свойства полимера подробно изучено для сополим

Количество сшивающего мономера не только влияет на пористые свойства получаемого полимера, но и на его химический состав и механические свойства. Увеличение количества сшивающего агента приводит к увеличению степени сшивки и, следовательно, к более раннему осаждению полимера в реакционной смеси. Чем больше степень сшивки, тем меньше ядра и глобулы полимера сольватируются мономером. В результате пористый монолит состоит из морфологических структур и пор меньшего размера. Влияние количества ЭДМ

Радикальная полимеризация, которая используется для получения пористых монолитов это экзотермический процесс, происходящий с выделением тепла [24]. При получении небольших колонок для аналитических целей это не является проблемой, однако, для колонок с большим объемом точный контроль температуры полимеризации является сложной задачей. В отсутствии перемешивания смеси внутри колонки приводит к уменьшению способности эффективно распределять теплоту полимеризации. При полимеризации в цилиндре т

В способе, описанном в п.п.

1.2.

1.1-4., монолит получают с использованием органических растворителей. Получаемые материалы обычно гидрофобны. Использование водных или водно-органических растворителей, предложенное Хьертеном позволяет использовать для полимеризации как гидрофильные (полярные), так и неполярные мономеры. Этот метод лежит в основе получения капиллярных колонок и колонок, полученных сжатием на основе акриламида. Полимеризационная акриламид, диакриламид смесь состоит

1.2.2. Получение монолитов на основе силикагеля (золь-гель процесс) Второй способ - образование монолитной пористой фазы на основе силикагеля in situ в результате золь-гель процесса [12, 13, 36]. Золь-гель процесс включает в себя гидролиз и поликонденсацию тетраалкоксисиланов в растворе с определенным рН с последующей сушкой полученного влажного геля при нагревании. Образование геля происходит путем агломерации частиц золя в трехмерную сетку. Для получения бимодальной монолитной структуры нео

1.2.3. Спекание микрочастиц Третий метод - это спекание микрочастиц наполнителя in situ в капилляре [45]. Образование непрерывной структуры в процессе спекания схематически представлено на рис. 2. В качестве наполнителя используются Si02 или частицы полимера. Полученные таким способом колонки обладают высокой механической прочностью. Однако, этот способ сложен в исполнении. Кроме того, неподвижная фаза, полученная спеканием частиц, обычно разрушается при нагревании и действии щелочных раствор

1.2.4. Воспроизводимость получения различных монолитов Воспроизводимость получения колонок зависит от числа стадий. Очевидно, чем больше стадий необходимо для изготовления колонки, тем больше должен быть разброс результатов, полученных на разных колонках. Таким образом, силикагелевые чем колонки обладают более низкой которых воспроизводимостью, органополимерные, изготовление осуществляется в один шаг. Воспроизводимость получения монолитных колонок на основе силикагеля была оценена по времена

1.3. Свойства монолитных пористых колонок

1.3.1. Пористые свойства Структура монолитная пористая колонка состоит из структурных кластеров и пустот между ними. На единицу объема это можно записать в виде выражения: e,+ F s = l , 29 (5) где s^ - общая пористость колонки (мл/мл), Vs - объем структурных кластеров (мл/мл). Кроме общей пористости характеристиками монолитной колонки является также внешняя пористость 8ех (мл/мл), т.е. доля макропор на единицу объема и внутренняя пористость gmt (мл/мл), т.е. доля микро и мезопор. (6) ^т ^ех

1.3.2. Механические и гидродинамические свойства Монолитные колонки характеризуются высокой прочностью. Линейность зависимости давления на входе в колонку от скорости подвижной фазы иллюстрирует отсутствие деформации монолита [11, 26]. Для препаративных монолитных фаз эта зависимость линейна в интервале от О до 250 мл/мин. Давление при скорости 250 мл/мин составляет 25 атм [ 11, 32]. Максимальное давление, которое выдерживает этот сорбент - 200 атм. Мезопористая структура монолитных и набивны

1.4. Модифицирование поверхности пористых монолитов Некоторые монолитные колонки могут быть использованы для проведения анализа сразу после полимеризации. Полярность поверхности монолитных колонок на основе СТ-ДВБ такая же, как у колонок, заполненных частицами СТ-ДВБ [58, 59]. Поэтому СТ-ДВБ монолиты можно использовать в ОФ ВЭЖХ. В других случаях необходима химическое модифицирование пористой поверхности монолита. Модифицирование придает колонке свойства, необходимые для других видов жидкостн

1.4.1.Химическое модифицирование

Химическое модифицирование дает возможность закрепления таких функциональных групп, получения которых в ходе полимеризации невозможно по каким либо причинам. Функционализация достигается за счет добавления модификатора к монолитной колонке, на поверхности которой содерл<атся реакционноспособные группы. Так при сополимеризации винилбензилхлорида и ДВБ на поверхности полимера присутствуют хлорметильные группы. В работе [23] проводится модифицирование этих групп in situ добавлением в реакцион

Химическое модифицирование монолитных колонок на основе силикагеля проводят по реакции с алкиламиносиланами, которые являются хорощими силанизирующими агентами для реакции в колонке [14]. Закрепление октадецилсилильных групп уменьшает объем мезопор приблизительно на 20%. Доля объема, занимаемого привитыми алкильными группами, составляет 5 % от объема колонки, что в

2.5 раза меньше, чем для набивной колонки. Влияние прививки о д е на пористые свойства монолитных и набивных колонок предст

1.4.2. Динамическое модифицирование Динамическое модифицирование дает дополнительные возможности изменения химии поверхности хроматографической колонки. Для этих целей используют поверхностно-активные вещества (ПАВ), в структуре которых есть крупная гидрофобная часть, обеспечивающая адсорбцию молекулы на поверхности полимера за счет гидрофобных взаимодействий, и ионогенная группа. В работе [73] поверхность капилляра, полученного полимеризацией бутилметакрилата и ЭД]У1А, динамически и модифици

1.5.2. Макропористые полимерные монолитные колонки В начале 90-х г. была предложена новая категория макропористых полимерных монолитных колонок, полученных очень простым способом. В противоположность дискам, их получение проводят in situ в колонке или капилляре. Способ получения таких колонок («молдинг» синтез) подробно описан в п.

1.2,1. На основании этого способа получают колонки Swift (ISCO, США), используемые для разделения полимеров. Свойства колонок представлены в табл. 13

1.5.4. Колонки на основе сжатого полиакриламидного геля Один из первых способов получения монолитных колонок был предложен Хьертеном и заключался в получении высокосшитого геля путем полимеризации в водном растворе Л'^Л^-метилен-бмс-акриламида и акриловой кислоты, в присутствии соли с последующим гидролитическим сжатием фракции до ее первоначального объема [10, 35]. Позднее эта технология была усовершенствована, в качестве сшивающего агента стали использовать диакриламид пиперазина. Получени

1.5.5. Монолитные колонки на основе силикагеля (Chromolith) Монолитные колонки на основе силикагеля Chromolith получают на основе золь-гель технологии с использованием высокочистых алкоксисиланов (п.

1.2.2,). Коммерчески доступные колонки модифицированы октадецильными группами. Размер макропор монолитного силикагеля составляет 2 мкм, размер мезопор - 13 нм [85, 86]. Площадь поверхности достигает 300 м/г, что пор к размеру каркасных структур сопоставимо с площадью поверхности набивной ко

1.6. Области применения монолитных колонок

1.6.1. Ионообменная хроматография Ионообменная хроматография - один из распространенных вариантов хроматографии, в котором монолитные колонки всех видов нашли свое применение. В первую очередь, монолитные колонки стали использоваться в анионообменной хроматографии (АО) для разделения биологических макромолекул. В АО используются монолитные колонки с закрепленными четвертичными аммониевыми группами или группами диэтиламина в качестве лигандов. Такие сорбенты используются как в аналитических, т

1.6.2. Обращеннофазовая жидкостная хроматография Обычно в этой области хроматографии используют монолитные колонки в виде дисков и стержней. Гидрофобность неподвижной фазы зависит от плотности расположения алкильных радикалов на поверхности и от числа атомов углерода в цепи радикала. На колонке SilicaRod в варианте ОФ ВЭЖХ было получено [98] разделение витаминов К1, К2 и КЗ и разделение лекарственных препаратов парацетамола, кофеина и бромфенирамина. Для разделения протеинов в варианте ОФ ВЭЖ

1.6.3. Аффинная хроматография ]Монолитные сорбенты широко используются в аффинной хроматографии для разделения биополимеров. Биологические взаимодействия основаны на образовании специфических комплексов комплементарных молекул: антигенантитело, энзим-субстрат, энзим-ингибитор, гормон-рецептор. Чаще всего используют комплекс антиген-антитело. На этом основана иммуноаффинная хроматография и иммуномониторинг (контроль накапливания антител в живых организмах) [64]. В этом варианте хроматографии и

1.6.4. Капиллярная электрохроматография Капиллярная электрохроматография - метод разделения незаряженных молекул, сочетающий в себе высокую селективность ВЭЖХ и эффективность капиллярного зонного электрофореза. Появление монолитных колонок рещает ряд проблем, ограничивающих применение этого метода. Рещается проблема набивания капилляров, так как капилляр заполняется жидкой полимеризационной смесью и проводят полимеризацию прямо в капилляре. Капилляры на основе монолитной неподвижной фазы боле

1.6.5. Биореакторы и твердофазное детектирование Пористые свойства монолитных колонок и высокая скорость массообмена обусловливает перспективность их использования как биореакторов. При создании биореакторов на твердых подложках существует проблема уменьшения активности иммобилизованного энзима, по сравнению с его индивидуальной формой из-за медленной диффузии макромолекул к активным центрам биореактора. Однако, сравнение макропористых частиц и монолита, иммобилизованных трипсином (при одинак

2.1. Реагенты и растворы Для приготовления элюентов и растворов использовали следующие соединения: органические растворители: ацетонитрил (сорт 1, Криохром, Россия); этанол 96% (Ферейн, Россия); пропанол-2 (Химмед, Россия). Соли: нитрат меди, х.ч., нитрат кобальта, х.ч,, сульфат цинка, ч.д.а., нитрат никеля, ч.д.а., хлорид марганца, ч.д.а., нитрат кадмия, х.ч., перхлорат натрия, ч.д.а. (все Реахим); хлорид натрия, ацетат натрия, гептагидрат дигидрофосфата натрия и гидрофосфат натрия (Mallinck

2.2. Колонки и сорбенты В работе изучены коммерчески выпускаемые монолитные пористые колонки на основе 2 типов матрицы. Были использованы CIM диски с ГМАЭДМА матрицей с различными функциональными группами - CIM Ероху и CIM EDA (коммерчески доступны) (BIASeparations, Словения); CIM с диольными группами (С1М-Диол), модифицированные диэтилентриамином (С1М-ДЭТА), триэтилентетрамином (С1М-ТЭТА), иминодиуксусной кислотой (С1М-ИДК), Lпролином (CIM-Pro) и L-гидроксипролином (CIM-HyPro). А также монол

2.3. Аппаратура В работе использовали хроматографическую систему, состоящую из следующих частей: насос высокого давления Beckman (модель114М, Beckman, США) или насос высокого давления Shimadzu с программируемой скоростью потока элюента (модель LC-10AT, Shimadzu Europe GmbH, Германия); инжектор (модель 7125) с дозирующей петлей объемом 20 мкл (Rheodyne, США);фотометрический детектор Uvicord S (модель 2238, LKB Bromma, Швеция) или кондуктометрический детектор Conductoiyser (модель 5300В, LKB Br

2.4. Методика эксперимента

2.4.1. Модифицирование поверхности CIM диска диэтилентриамином и триэтилентетрамином Модифицирование поверхности проводили по методике, приведенной в источниках [55, 62 ] . Диск промывали метанолом, высущивали и помещали в чистый олигоэтиленамин на 24 часа. Затем промывали диск водой до нейтральной реакции на амин с Cu(II).

2.4.2. Гидролиз эпоксидных групп ГМА-ЭДМА матрицы Гидролиз проводился по методике, описанной в работе [55]. Диск помещали в 5-10'' М раствор серной кислоты, нагревали до 50^С и поддерлшвали эту температуру в течение 3-х часов. Затем промывали диск дистиллированной водой до нейтральной реакции промывных вод.

3. Модифицирование CIM дисков аминокислотами Модифицирование дисков аминокислотами проводили аналогично описанному в литературе для силикагеля [112]. 7-8 ммоль аминокислоты растворяли в 5 мл дистиллированной воды, рН раствора подвели до 10-11 1 М NaOH. Помещали CI1VI диск в раствор и встряхивали в течение суток при температуре бО^С. Затем диск 3 раза промывали 50 мл дистиллированной воды. Для гидролиза непрореагировавших эпоксидных групп, диск встряхивали в течение 3-х часов в 1*10'^ М НС1 пр

4. Определение максимальной сорбционной емкости монолитной колонки по Zn^^ Из литературных данных известно, что амин закрепляется в количестве

0.3-

0.4 ммоль/диск. По методике, приведенной в источнике [113] максимальную сорбционную емкость определяли в статических условиях. Диск помещали в водный раствор, содержащий 30-ти кратный избыток металла по отношению к предполагаемой емкости колонки (9 ммоль Zn(II)) на 12 часов. Затем промывали водой и проводят десорбцию

0.01 М НС1 в

5. Спектрофотометрическое определение ионов металлов Для построения градуировочных графиков в мерные колбы объемом 25 мл вводили от 1 до 5 мл растворов солей металлов с содержанием металла 5 мкг/мл, вводили

2.5 мл

0.025%-ного раствора ПАР в

0.05 М боратном буферном растворе (рН

9.18) и

2.5 мл

0.05 М боратного буферного раствора, разбавляли водой до метки. Измеряли оптическую плотность растворов относительно раствора ПАР, приготовленного аналогично, и строил

2.4.6. Образование комплексов иминодиуксусная кислота - медь (II) на поверхности сорбентов Колонку, модифицированную группами иминодиуксусной кислоты (ИДК) последовательно промыли 50 мМ раствором ЭДТА в

0.5 М NaCl (рН

8) и дистиллированной водой. Затем уравновесили колонку

0.1 М ацетатом натрия (

0.5 М NaCl, рН 4). Далее пропускали 50 мМ раствор CuS04. Избыток меди удаляли промывкой

0.1 М ацетатом натрия (

0.5 М NaCl, рН 4).

2.4.7. Концентрирование ги

2.4.8. Расчет эффективности колонки Вычисление линейной скорости пропускания элюента проводили по формуле: где и — линейная скорость (см/мин), F - объемная скорость потока (мл/мин), г радиус колонки, ет - пористость (мл/мл). Для колонок для колонок типа Chromolith RP-18e использовали значение 8т равное

0.8, для для CIM дисков

0.5. При построении зависимостей высоты, эквивалентной теоретической тарелке (ВЭТТ, Я), в каждой точке рассчитывали эффективность колонки по формуле: iV=

2.4.9. Приготовление образцов чая, кофе и других напитков

2.4.

Пробоподготовку проводили согласно методике, описанной в литературе [115]. Точные навески

0.5-1 г чайных листьев, мате или молотого кофе и 62 помещали в коническую колбу объемом 150 мл, добавляли 80 мл горячей воды (ВО^С). Раствор нагревали на водяной бане в течение часа и затем фильтровали. Колбу промывали горячей водой и тоже пропускали через этот фильтр. Повторяли это промывание дважды, собирали все фильтраты и объединяли в колбе на 100 мл. Затем охлаждали до комнатной температуры и

Точную навеску

0.5 г растворимого кофе переносили в колбу на 50 мл и добавляли горячей дистиллированной воды, охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой до метки. Перед анализом раствор фильтровали через мембранный фильтр Whatman

0.45 мкм.

2.4.

9.3. Пробоподготовка кофеинсодерэюащих газированных напитков Газированные напитки на основе чая и энергетические напитки дегазировали 5 минут в ультразвуковой бане для дегазации [ 116]. Затем раствор фильтровали через мембранный фильтр Whatman

0.45 мкм.

В аналитической практике часто необходимо концентрирование определяемых микрокомпонентов из растворов большого объема. Наиболее эффективным способом является динамическое сорбционное концентрирование. Концентрирование осуществляют пропусканием исходного раствора через колонку или патрон, заполненный сорбентом в условиях, когда микрокомпонент будет сорбироваться на колонке с последующей его десорбцией малым объемом жидкости. Сорбционное концентрирование обычно обеспечивает хорошую избирательно

Ионообменные и комплексообразующие свойства монолитных пористых CIM дисков, модифицированных олигоэтиленаминами Как правило, прямое определение следовых количеств переходных и тяжелых металлов невозможно без предварительного концентрирования этих металлов из растворов. Сорбционное концентрирование с использованием комплексообразующих сорбентов является одним из наиболее эффективных способов решения этой задачи. Среди многообразия сорбентов реагентам. функционально-аналитических можно выделить

3.2.1. Свойства сорбентов Для исследования были выбран монолитный пористый CIM диск и 3 колонки, заполненные пористыми частицами. Все сорбенты модифицированы ИДК. Сорбент на основе агарозы HiTrap Chelating представляет собой сополимер D-галактозы и 3-ангидрогалактозы и широко используется для препаративных и аналитических целей в биохимии. Недостатком кoJЮнки этой колонки является сильная набухаемость, приводящая к очень высокому давлению на входе в колонку и низкая механическая устойчивость.

3.2.2. Выбор условий элюирования Согласно литературным данным [130], наиболее полное связывание гистидин-содержащих пептидов на ИДК-Си(11) колонках происходит в интервале рН от 7 до 8. Как было сказано выше, для десорбции белков и пептидов с колонки можно использовать 3 типа элюирования - создание фадиента рН для разрушения комплекса, лигандный обмен (вытеснение 85 имидазолом) и разрушение хелата. Так как цель исследования - концентрирование всех гистидин-содержащих пептидов и перен

Одной из основных задач аналитической ВЭЖХ является разделение максимального числа хроматографических пиков за минимальное время. Если компоненты анализируемой смеси слабо отличаются по удерживанию, то обычно возможна оптимизация состава гюдвижной фазы, обеспечивающая приемлемые скорость анализа и необходимое разрешение хроматофафических пиков в изократических условиях. Однако в отдельных случаях анализируемая смесь может содержать вещества, сильно различающиеся по удерживанию, что существенн

4.1. Использование градиента потока в ионной хроматографии для разделения анионов Одним из основных требований, предъявляемых любому аналитическому методу, является экспрессность. Поэтому в последнее время в ВЭЖХ отмечен рост интереса к быстрым разделениям, в частности, одном из ее вариантов ионной хроматографии (ИХ). В 1980-х годах компания Dionex выпустила одну из первых колонок для быстрого определения анионов. Разделение смеси неорганических анионов на колонках размером 250 х 4 мм или 250

1. Ионообменные свойства CIM дисков, модифицированных ааминокислотами а-Амипокислоты - цвиттерионные молекулы, которые используют для модифицирования поверхности силикагеля и полимерных сорбентов для получения ионообмепников. Сорбенты, полученные таким образом, обладают хорошей кинетикой массообмена и селективностью разделения. Для модифицирования CIM дисков были выбраны L-гидроксипролин (pKi=

1.92; рК2=

9.73) и L-пролин (pKi=l,93; рК2=

10.60). Эти аминокислоты имеют третичн

1.1. Влияние природы элюента, его концентрации ирН Элюирующая способность водных растворов органических определяется значением константы диссоциации кислоты, кислот числом протонированных карбоксильных групп в составе молекул (то есть зарядом аниона) и размером аниона. В качестве элюентов использовали 5 мМ водные растворы различных органических кислот при собственном значении рН. Константы кислотности используемых карбоновых кислот представлены в табл. 24. Времена удерживания анионов на CIM-

2. Анионообменные свойства CIM дисков, модифицированных олигоэтиленаминами Модифицирование CIM дисков олигоэтиленаминами и измерение их сорбционной емкости подробно описаны в главе 2 (п.п.

2.,

2.4.4.). Ионообменные свойства сорбентов определяются природой функциональных групп, взаимным влиянием привитых молекул и матрицы. Ионообменные свойства С1М-ТЭТА и С1М-ДЭТА на примере удерживания органических модельных соединений описаны в главе 3 (п.

3.1.3.). Присутствие на поверхности С1М-ДЭТА и С1М-ТЭТА первичных, вторичных и третичных аминогрупп обусловливает их анионообменные свойства. Поэтому представляет интерес оценить селективность полученных сорбентов по отношению не

3. Зависимость эффективности разделения от скорости подвижной фазы Согласно кинетической теории хроматографии, размывание хроматографических пиков обусловлено, главным образом, тремя независимыми процессами, вклад каждого из которых может быть оценен с гюмощью расширенного уравнения Ван Деемтера или уравнения Родригеса (24), где Л, В, {С+К) - члены, учитывающие неравномерность движения потока подвижной фазы. Таким образом, эффективность хроматографической колонки имеет сложную зависимость от

3.1 .Эффективность CIMдисков, модифицированных олигоэтиленаминами и аминокислотами Для оценки эффективности С1М-Диол и С1М-ТЭТА были построены зависимости ВЭТТ от линейной скорости пропускания элюента (рис.

23) аминосульфокислоты (АСК). Максимальная эффективность С1М-Диол достигается при линейной скорости подвижной фазы и =

0.6 мм/с (объемная = скорость - 2 мл/мин), для С1М-ТЭТА при и =

1.5 мм/с (объемная скорость - 5 мл/мин) Различие ^между координатами минимумов С1М-Диол

3.2. Эффективность СШколонки, состоящей из нескольких CIM дисков Эффективность хроматографический колонки прямо пропорциональна ее длине. В CIM картридж можно помещать до 4-х дисков и, теоретически, повысить эффективность разделения в 4 раза. Были изучены зависимости ВЭТТ от линейной скорости элюента для колонки, состоящей из трех CIM дисков (общая длина колонки - 9 мм), модифицированных пролином. Полученные результаты (рис.

25) показали, что при линейных скоростях до

0.5 мм/с (со

4.1. Разделение анионов с применением градиента потока Гидродинамические свойства монолитных колонок, то есть возможность пропускать подвижную фазу с высокой скоростью и при низком давлении на входе в колонку, позволяют варьировать объемную скорость элюента в широком диапазоне от 1 до 10 мл/мин и более. Для монолитных пористых CIM дисков давление на входе в колонку при линейной скорости 3 мм/с (соответствует объемной скорости 10 мл/мин) не превышает 20 атм. Это дает возможность получить разде

4.2. Влияние градиента потока на эффективность разделения и разрешение пиков Уменьшение эффективности разделения при высокой скорости связано с размыванием хроматофафической полосы в колонке, в соединениях системы и в детекторе. Размывание в колонке во время фадиента потока, который начинается в минимуме кривой Ван Деемтера, определяется коэффициентом {С+К) уравнения Родригеса (24). Дополнительный вклад в размывание хроматографической полосы (ojubing) вносят соединения хроматографической сист

1. Полиароматические углеводороды Полиароматические углеводороды (ПАУ) принадлежат к широкому классу органических веществ, обладающих канцерогенными и мутагенными свойствами. ПАУ обнаружены в воде, воздухе, почве, а также в продуктах питания [ 145]. Они образуются в результате неполного сгорания органических веществ. Основными источниками ПАУ являются промышленные выбросы газов в атмосферу, выхлопной дым автомобилей, а также табачный дым [ 146]. Загрязнение продуктов питания происходит вследс

1.1. Выбор условий для разделения ПЛУ с градиентом потока Оптимальный закономерностей профиль фадиента потока можно или определить Г1АУ. из удерживания гомологов Условия хроматографического анализа должны обеспечивать селективное разделение первых членов гомологического ряда и максимальную эффективность в изофлюентном режиме. Поэтому, сначала необходимо определить оптимальный состав подвижной фазы и скорость ее подачи, удовлетворяющие описанным выше требованиям. Профиль изменения градиента п

), при повышении скорости потока элюента происходит уменьшение эффекливности разделения вызванное размыванием зоны хроматографического пика в колонке, в соединениях системы и в кювете детектора [4]. Монолитные ко]юнки характеризуются малыми потерями эффективности разделения при повышении скорости элюента. Тем не менее, оценка возможных потерь для разделения ПАУ на кодюнке типа Chromolith RP-18е является важной задачей. Были получены зависимости ВЭТТ от линейной скорости элюента для бензола и

На основании проведенных исследований оптимальные условия для разделения ПАУ на монолитной колонке Chromolith Performance RP-18e в изофлюентном режиме: элюент - ацетонитрил/вода (60:40 об.%), скорость пропускания элюента равна 2 - 3 мл/мин. Оптимальный профиль градиента потока - увеличение скорости по логарифмическому закону, начальная точка которого — время выхода системного пика или время удерживания первого члена гомологического ряда, конечная - время удерживания последнего. Начальная скор

2. Разделение ПАУ на ультракороткой монолитной пористой колонке с градиентом потока элюента В аналитической практике часто возникают такие задачи, когда эффективность обычной хроматохрафической колонки длиной 5-10 см является избыточной. Появление ультракоротких монолитных пористых колонок длиной 5 мм дает новые возможности для развития экспресс-анализа. Давление на входе в короткие монолитные колонки настолько низкое, что подача элюента в колонку может осуществляться с помощью микроперистал

2.1. Выбор условий для разделения ПАУ в изофлюеитных условиях и с градиентом потока Определение состава подвижной фазы Принцип выбора оптимальных условий для разделения гомологов в изофлюентном режиме и с градиентом потока изложен в п.

4.2.

1.1. Для колонки Chromolith RP-18e Guard Cartridge 5x

4.6 мм полное разрешение пиков слабоудерживаемых членов гомологическо! о ряда достигалось для элюента вода - ацетонитрил (60:40 об. %). Этот элюент использован для оптимизации фадиент

2.2. Разделение ПАУ с градиентом потока В оптимальных изофлюентных условиях [элюент - ацетонитрил/вода (40:60 об. %)) при скорости 3 мл/мин, которая согласно кривой Ван Деемтера (рис.

35) обеспечивает максимальную эффективность, были разделена модельная 8-ти компонентная смесь ПАУ за 6 мин (рис. 36, а). Эта смесь также разделена с линейным градиентом потока элюента от 3 до 10 мл/мин (рис. 36, б). Начальная точка фадиента - время выхода нафталина (

0.5 мин), конечная - пика бенз(о)

3.1. Выбор условий для разделения ди-н-алкилфталатов Удерживание ди-н-алкилфталатов (С1-С8) было изучено для подвижных фаз с содержанием ацетонитрила от 50 до 70 %. Времена удерживания 129 мoнoJигrнyю пористую колонку Chromolith Performance RP-18e 100x

4.6 мм. Согласно ;штературе [14], ее гидрофобность набивных кoJЮпoк на основе силикагеля, представлены в табл. 34. В качестве оптимальной для применения элюирования с градиентом потока была выбрана подвижная фаза состава ацетонитрил-вода

3.2. Разделение ди-н-шшилфталатов с градиентом потока Изократическое разделение ди-и-алкилфталатов (Ci-Cg) в изофлюентном режиме (элюент - ацетоиитрил/вода (70:30 об.%), скорость 2 мл/мин) не является оптимальным и фебует 26 мин (рис. 38, а). Продолжительность разделения определяется, главным образом, удерживанием ди-н-гептил и ди-ноктилфталатов, хроматографические пики которых значительно отстоят от пиков остальных сорбатов на хроматограмме. Изофлюентное разделение при 6 мл/мин позволяет сок

В настоящее время большое внимание уделяют контролю содержания алкалоидов ipyniibi метилксантинов в пищевых продуктах и лекарственных препаратах. Важнейшими представителями этой ipynnbi соединений, имеющими высокую биологическую активность, ЯВЛЯЕОТСЯ теофиллин, теобромин и кофеин, структурные формулы которых представлены в табл. 36. Эти соединения в кофе, какао и шоколаде. Кофеин используют как вкусовую добавку в газированных напитках, он стимулирует сердечную деятельность и центральную нервн

5.1. Выбор условий для разделения теобромина, теофиллина и кофеина Обычно разделение метилксантинов проводят ОФ ВЭЖХ па полимерных колонках на основе СТ-ДВБ или поливинилового спирта [154] или силикагелевых обращенно-фазовых колонках [ 156-158]. Разделение проводят и изократических или градиентных условиях [159] с использованием подвижных фаз, состоящих из ацетонитрила, метанола или изопропанола в фосфатном буфере или уксусной кислоте. Из литерат>'ры известно [154], что в варианте ОФ ВЭЖХ