Низкая цена
Всего 249a за скачивание одной диссертации
Скидки
75 диссертаций за 4900a по акции. Подробнее
О проекте

Электронная библиотека диссертаций — нашли диссертацию, посмотрели оглавление или любые страницы за 3 рубля за страницу, пополнили баланс и скачали диссертацию.

Я впервые на сайте

Отзывы о нас

Взаимодействие ионов и наночастиц биофильных 3d-металлов с протеиназами Candida albicans : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.01

Год: 2013

Номер работы: 2514

Автор:

Стоимость работы: 249 e

Без учета скидки. Вы получаете файл формата pdf

Оглавление и несколько страниц
Бесплатно

Вы получаете первые страницы диссертации в формате txt

Читать онлайн
постранично
Платно

Просмотр 1 страницы = 3 руб



Оглавление диссертации:

ВВЕДЕНИЕ Актуальность работы. Роль ионов биофильных Зб/-металлов непосредственно связана с регуляцией ферментативных процессов. При этом основу протекающих взаимодействий ионов металлов Одним составляют с процессы как комплексообразования макромолекулярными ферментами биолигандами. из возможных донорных центров в макромолекулярном биолиганде является пептидная связь. Однако, ее плоская геометрия, транс-ориентация фрагментов и делокализация заряда снижают ее комплексообразующую активно

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР В литературном обзоре отражено современное состояние и основные тенденции ферментативного катализа с участием протеиназ семейства Candida. Основное внимание уделено роли ионов Зй?-металлов. Обсуждаются особенности действия ингибиторов протеиназ Candida albicans. Рассмотрены перспективы применения полимерных структур для стабилизации наночастиц d-металлов.

Протеолитические ферменты (протеиназы) играют исключительно важную роль в обмене веществ всех живых организмов. Их основная функция - расщепление различных высокомолекулярных субстратов белкового типа до составляющих аминокислот или легко усваиваемых клеткой их соединений [1,2]: RCH - С - NH - CHR' - + (п+1) Н 2 0 ^ > - RCH - С - ОН + n H 2 N -CHR'- II О п || О Протеиназы также могут влиять на активность других ферментов и пептидов. Патогенные грибковые микроорганизмы и бактерии в р

1.2. Роль ионов 3</-металлов в ферментативном катализе Активной частью базовой формулы соединений-модуляторов ферментативной активности протеиназ Candida albicans являются ионы биофильных Зя?-металлов, роль которых в ферментативных процессах хорошо известна. В зависимости от способа участия металла в ферментативных процессах, ферменты делятся на три группы. Для первой группы ферментов характерно наличие одного или нескольких прочно связанных ионов металлов, принимающих участие в каталити

Функции металлов |, в ферментативном катализе: не | , участвуют | являются электростатическими стабилизаторами | [42]. влияют на окислительно-восстановительные реакции Рассмотрим свойства некоторых наиболее распространенных ионов металлов - участников ферментативных процессов. Например, Zn(II) стабилизирует отрицательный заряд ферментов и активирует субстрат, обеспечивая комплементарность активных центров фермента и субстрата [41, 42]. При этом ион Zn(II) способен взаимодействовать с д

Поиск и изучение свойств потенциальных нетоксичных ингибиторов протеиназ позволит управлять патогенностью грибковых культур и приведет к разработке новых антимикотических средств. С использованием процессов биосенсорных ассоциации и технологий диссоциации установлена ингибиторов зависимость ацетилпепстатина и пепстатина А по отношению к SAP Candida albicans [67]. Установлено, что эти процессы зависят от рН. Величины констант присоединения и отщепления протона уменьшаются с ростом рН от

1.4. Биологически активные наночастицы {/-металлов Роль ионов металлов в функционировании биологических систем, в том числе ферментов, неоспорима и значима. При этом в последнее десятилетие неуклонно растет доля исследований касающихся действия наночастиц металлов на биологически активные вещества. Особое свойство - наноразмерность обеспечивает повышенную проницаемость наночастиц и высокий уровень их активности. Поэтому изучение свойств систем, содержащих наноразмерные объекты, интересно и в

Диапазон используемых способов получения наноразмерных частиц (НРЧ) металлов весьма широк. Если за основу классификации методов получения наночастиц взять тип исходного вещества и особенности его обработки, можно выделить два основных подхода: «физический» (фазовые превращения первого рода в отсутствие химических реагентов) и «химический». Наибольшее распространение в первом случае получили конденсационные методы, заключающиеся в «сборке» наноразмерных частиц из отдельных атомов (молекулярн

1.4.2. Стабилизация наноразмерных частиц 3</-металллов полимерными структурами НРЧ металлов представляют собой высокоактивные частицы с сильно развитой поверхностью, что обусловливает протекание всевозможных, часто весьма нежелательных, самопроизвольных процессов. НРЧ весьма чувствительны к примесям, быстро связываются друг с другом при повышении концентрации в растворе, кипячении и взбалтывании раствора, агрегируют под действием необратимы. Поэтому излучения. Эти процессы, как правило, з

1.4.3. Биологическая активность наночастиц {/-металлов Наночастицы металлов играют важную роль в быстро развивающихся отраслях науки, которые специализируются на изучении объектов (существующих в природе, а чаще искусственно приготовленных) с 47 наноразмерными структурными блоками. Широкому использованию наночастиц (особенно для биологических приложений) и содержащих их наноматериалов препятствуют трудности в получении составов с узким распределением частиц по размерами и стабильными воспро

В работе использовали секреторные аспарагиновые протеиназы Candida albicans индуцируемого (SAP2 С.alb.) (Мг=53680

Да) (Protein Date Bank: doi:

10.2210/pdb lzap/pdb) и конститутивного типа (SAP4 C.alb) (Mr=42820

Да) (Protein Date Bank: doi:

10.2210/pdb 2qzx/pdb) [20], выделенные из надосадочнои жидкости при выращивании патогенных дрожжеподобных грибов Candida albicans биомассы и (C.alb.), с последующим этанолом по центрифугированием оригинальной аллергенов переосажде

Электронные спектры поглощения снимали на спектрофотометре Lambda 750 (Perkin Elmer, UK) в области длин волн 190-900 нм, при Т=25±

0.01 °С и 36±

0.01 °С с использованием термостатирующей системы, включающей термостатируемый держатель кювет, проточный термостат Julabo МВ-5А и термостат Пельтье РТР-1. Для измерения использовали кварцевые кюветы, толщина которых равна 1см. Точность измерения оптической плотности (А) составляла ±1%. Фоновый электролит

0.1 М LiC104. ИК-спектры по

2.4.1. Расчет констант устойчивости и состава комплексных форм в растворе (метод насыщения или сдвига равновесия) Методом спектрофотометрии [101] изучали зависимость поглощения раствора А от Ci/cM (где cL и см - концентрации в моль/л реагента L и компонента М соответственно) при постоянной концентрации лиганда. Данная зависимость представляет собой кривую насыщения. Точка излома на кривой насыщения отвечает отношению стехиометрических коэффициентов, которое равно отношению концентраций реаги

Экспериментальные данные для расчета условных констант образования (IgK') и состава комплексных форм в растворе обрабатывали с использованием метода математического моделирования по программе профессора Ю.И. Сальникова CPESSP [102] с формированием модели существования в растворе всех теоретически возможных форм. Работа программы основана на минимизации целевой функции F при выбранной стехиометрии равновесий: N П _ П _ 1 2 ' ° П Р = Т,( эксп,,- расч,,) -^ '=1 С ' ) 6 расч,1 где пэксп1

2.4.3. Определение кажущихся констант ассоциации методом Скэтчарда Оценку величин кажущихся констант ассоциации (кл) и количества идентичных участков связывания (п) проводили в двойных системах [SAP-Hb], [НЬ-М], [SAP-Щ, [SAP-ML] и тройной системе [SAP-Hb-M] (где SAP - секреторная аспарагиновая протеиназа, НЬ - субстрат, гемоглобин, М - модулятор). Для построения графиков в координатах Скэтчарда [103-105] равновесной использовали концентрации серию экспериментов по определению комплексов:

2.4.4. Построение изотерм сорбции Co(II) на нитратцеллюлозную мембрану с закрепленной SAP Candida albicans Адсорбат. Для работы использовали растворы Со(>Юз)2х6Н20, диапазон концентраций составил: 1x10"-1x10" моль/л. Адсорбент. Использовали мембрану на основе нитратцеллюлозы с иммобилизованной на поверхности SAP С.alb. Адсорбцию фермента проводили из ацетатного буферного раствора с рН=

4.3(

4.0) (на фоне

0.1 М LiC104) при 298 К. В колбы помещали нитратцеллюлозны

2.4.5. Определение протеолитической активности протеиназы Candida albicans Активность фермента увеличению скорости (А$АР) определяли в стандартных условиях по реакции указывали по сравнению как с каталитической реакции некаталитической. Скорость изменение концентрации субстрата (мг/л) за единицу времени (мин). В мерную колбу на 5 мл вводили

0.52 мл раствора гемоглобина (НЬ) с концентрацией

1.91 ><10"5 моль/л (сНь в рабочем растворе - 2x10"6 моль/л или 123x1

Для проведения испытаний на противогрибковую активность использовали штаммы, поддерживаемые в коллекции ФГУН «Казанский Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора РФ»: Candida albicans Y-4, Candida parapsilosis Е-10, Candida tropicalis Y-7, Candida krusei Y-3, а также Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus terreus, Penicillium funiculosum, Penicillium chrysogenum, Penicillium ochro-chloron, Paecilomyces variotii. Скрининговые исследования а