Низкая цена
Всего 249a за скачивание одной диссертации
Скидки
75 диссертаций за 4900a по акции. Подробнее
О проекте

Электронная библиотека диссертаций — нашли диссертацию, посмотрели оглавление или любые страницы за 3 рубля за страницу, пополнили баланс и скачали диссертацию.

Я впервые на сайте

Отзывы о нас

Комплексная система оценки антиоксидантной активности полифункциональных элементоорганических соединений и комплексов биометаллов : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.16, 02.00.08

Год: 2012

Номер работы: 60303

Автор:

Стоимость работы: 249 e

Без учета скидки. Вы получаете файл формата pdf

Оглавление и несколько страниц
Бесплатно

Вы получаете первые страницы диссертации в формате txt

Читать онлайн
постранично
Платно

Просмотр 1 страницы = 3 руб



Оглавление диссертации:

Одной из важных задач медицинской химии на пути создания лекарственных препаратов является отбор перспективных физиологически активных соединений с помощью системы первичного скрининга. На ранних этапах тестирования того или иного вида активности используют модельные реакции и процессы, либо in vitro биохимические системы, максимально приближенные к физиологическим условиям. В последние годы резко возрос интерес к получению новых веществ, обладающих обусловлен (рак, диабет, аксорбиновая антио

Методы биотестирования потенциальных фармацевтических препаратов на антиоксидантную активность

1.1 Образование и функционирование активных метаболитов кислорода Активные метаболиты кислорода (АМК) являются «необходимым злом» аэробной формы жизни, при этом они имеют свои физиологические функции. АМК постоянно образуются в процессе дыхания, под влиянием ультрафиолетовых лучей, в ходе спонтанного окисления некоторых соединений, а также при функционировании ряда ферментов. Аэробная жизнь предполагает способность организмов противостоять разрушающему действию АМК, особенно в условиях окисли

Определение содержания АМК в простых химических растворах или комплексных биологических системах может производится различными способами. Некоторые методы предназначены для конкретных АМК, например ОН, однако существуют разногласия по поводу обоснованности их применения [13]. Большое количество методик определения содержания 0{' и "ОН основаны на методе ЭПР. о2Супероксид анион-радикал, генерируемый в большой концентрации при импульсивном радиолизе из соли КОг, в простых химических и би

1.3. Аитиоксидантная активность В различных работах, посвященных изучению антиоксидантов, встречаются многочисленные термины, используемые для обозначения антиоксидантной активности. Среди них общий - антиоксидантный «потенциал» (сила, эффективность, параметр, способность и активность). Для химика слово «активность» лишено смысла без указания конкретных условий реакции, таких как давление, температура, растворитель, реагенты и контрольные метки. «Аитиоксидантная активность», измеренная в отде

Метод, основанный на ингибировании поглощения кислорода (Inhibited Oxygen Uptake (IOU) Method). Экспериментальное определение скорости поглощения кислорода или скорости образования пероксидов сопряженных диенов позволяет получить значения кв для антиоксиданта. С использованием стирола в качестве (АИБН) в качестве радикального субстрата и азоизобутиронитрила инициатора измеряют скорости потребления кислорода в присутствии и в отсутствие различных токоферолов в хлорбензоле, используя систему д

В результате проведенного анализа существующих методов оценки антиоксидантной активности (Табл.

2) становится очевидно, что результаты ни одного из методов не отражают реальной «общей антиоксидантной активности» соединения. Значения антиоксидантной активности, полученные с помощью таких конкурентных методов, как ORAC и ТЕАС могут быть полезны для оценки антирадикальной активности. Однако такие методы не применимы для оценки способности антиксидантов ингибировать такие процессы, как перо

Целью данной работы является разработка общего подхода для комплексной оценки антиоксидантной активности полифункциональных элементоорганических соединений и комплексов биогенных металлов. Исследуемые соединения стали результатом реализации двух направлений дизайна синтетических антиоксидантов: создание фенольных аналогов а-токоферола - «ловушек» свободных радикалов и создание миметиков металлов, активных центров способных ферментов с антиоксидантной защитной активными метаболитами системы (с

С целью проведения сравнительного анализа и выбора эталонов сравнения в работе использованы известные применяемые антиоксиданты фенольного типа (1-5), аскорбиновая кислота (витамин С,

6) и галловая кислота (7). Тролокс (6-гидрокси-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-карбоновая кислота), является водорастворимым аналогом липофильного а-токоферола (витамина

Е) [5]. В его молекуле, также как и в молекуле токоферола, присутствует хромановое кольцо (бензо-у-дигидропиран), но отсутствует углевод

С целью изучения влияния природы заместителя в ор/ио-положениях фенольного кольца исследована активность фенолов (18-25), содержащих фрагменты борнеола. Борнеол является нейтральным компонентом древесной зелени и обладает выраженным бактерицидным действием. борнеол В настоящей работе изучена активность серии изоборнилфенолов (18* 25) как полусинтетических антиоксидантов [135, 136]. Соединение 19 (диборнол) в настоящее время проходит доклинические исследования в качестве перспективного преп

2.4. Фосфорсодержащие элементоорганическис соединения Выбор остатков фосфоновой и фосфиновой кислот и их производных в качестве элементоорганических фенольного ряда фрагментов обусловлен для тем, модификации что такие антиоксидантов фосфорорганические соединения, как золедроновая кислота (PubChem 68740), ризедроновая кислота (PubChem 5245) и ибандроновая кислота (PubChem 60852) применяются в качестве фармацевтических препаратов [137] и являются одобренными Агенством по контролю продуктов и л

2.5. Металлооргаиическис соединения на основе ферроцена Примером оригинальное применения ферроцена средство в фармакологии является в лекарственное ферроцерон, разработанное Институте элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова РАН и Ленинградском институте гематологии и переливания крови (Российский НИИ гематологии и трансфузиологии), предложенное для лечения железодефицитных анемий [144]. Ферроцерон натриевая соль ор/ио-карбоксибензоилферроцена В отличие от других препаратов желе

2.6. Комплексы металлов с дипиколиламином, содержащим 2,6-дитрет-бутилфепол Сочетание в одной молекуле антиоксидантной 2,6-m-mpemбутилфенольной группы и биогенного металла, способного менять степень окисления, открывает возможность для создания полифункциональных систем с различным механизмом действия. В настоящей работе исследована серия комплексов биогенных металлов (62-73) с дипиколиламиновым лигандом (61), содержащим 2,6-ди/?г/?е/?г-бутилфенол*. В качестве лиганда X использованы хлорид (6

2.7. Нитронилнитроксильные радикалы и комплексы меди (II) па их основе В последние годы внимание исследователей привлекают стабильные нитроксильные радикалы, проявляющие активность в качестве ингибиторов образования АМК, антиоксидантов, радиопротекторов, контрастных реагентов, антипролиферативных агентов [148]. Достигнуты большие успехи в разработке методов получения и исследовании широкого спектра свойств комплексов металлов с лигандами - нитроксильными радикалами [149, 150]. Однако незаслуж

С целью изучения влияния наличия парамагнитного центра в лиганде комплекса редокс-неактивного металла исследованы комплексы Sb, Ga, In, Ge, Sn с op/wo-семихинонами 83-86, а также их катехолатные аналоги 80-82*. Интерес представляет также изучение влияния природы непереходного металла в проявлении антиоксидантной активности исследуемыми соединениями. 81 М = Ga (83) Ge (84) In (85) Sn (86) Соединения 80-82 активно восстанавливают радикал ДФПГ и имеют следующие значения ЕС50: 36,2 ± 0,7 (80);

2.9. Комплексы сурьмы - ингибиторы лнпокенгеназы Известно, что комплексы Sb представляют интерес как физиологически активные вещества, способные встраиваться в белковые молекулы, выступая в качестве ингибиторов различных ферментов [155, 156]. В данной работе изучено влияние серии комплексов сурьмы 87-96* на активность окисления линолевой кислоты, катализируемого ферментом липоксигеназа LOX 1-В, для отбора соединений, которые являются потенциальными ингибиторами липоксигеназы и представляют ин

2.10. Результаты сравнительного анализа активности соединении с использованием сетевой структуры методов оценки Предложенный антиоксидантной в работе комплексный соединений, структуры подход для оценки активности сетевой содержащих различные реакционноспособные центры, позволяет выявить вещества-лидеры. Использование предполагает методов оценки активности (Табл. 13), перекрестное сопоставление результатов полученных для различных серий соединений в соответствии с тремя основными маршрутами

В работе использованы следующие вещества и реагенты: 1,1-дифенил2-пикрилгидразил (ДФПГ, «Aldrich»), этанол (96%), хлорид меди(П) («х.ч.»), неокупроин (2,9-диметил-1Д0-фенантрояин, «Aldrich»), соевая липоксигеназа (Lipoxidase from Glycine max (Soybean), Type I-B, «Sigma»), линолевая кислота (цис,цис-9,12-октадекадиеновая кислота, «Sigma», >99%), ксантин («Sigma»), ксантиноксидаза («Sigma»), хлорид тетразолия синего («Merck»), бычий сывороточный альбумин, тиобарбитуровая ионол (2,6-ди-/и/>

В работе было использовано следующее оборудование: кюветный спектрофотометр «Thermo Evolution 300 ВВ» (Великобритания), 96луночный планшетный спектрофотометр «Zenyth 200rt» (Австрия), термостат «Термит» (Россия), центрифуга «Hettich Universal 320R» (Германия). Соединения были синтезированы сотрудниками кафедры органической химии Химического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова (под рук. к.х.н. Н.Н. Мелешонковой, в.н.с, к.х.н. А.А. Прищенко; с.н.с, к.х.н. Д.Б. Шпаковского), Института органичес

3.3. Определение антирадикалыюй активности соединений с использованием Д ФПГ-теста Оценку антиоксидантной активности исследуемых стабильного радикала соединений с использованием 1,1-дифенил-2-пикрилгидразила (ДФПГ) проводили спектрофотометрически [85, 87-89, 158-160]. В первую очередь было проведено определение коэффициента молярного поглощения раствора радикала ДФПГ в этаноле при А™* 517 нм (Рис. 1, Табл. 1). Рис. 1. Зависимость интенсивности поглощения при 517 нм (А517) от концентрации р

Метод получил свое название от аббревиатуры CUPRAC - Copper Reducing Antioxidant Capacity - способность антиоксиданта восстановливать ион меди(И) [109, 161-163]. Данный метод основан на реакции восстановления меди в комплексе с неокупроином выступать (2,9-диметил-1,10- фенантролин) и дает представление о способности исследуемого вещества в качестве донора электрона. Эксперимент проводили по увеличению оптической плотности раствора комплекса при длине волны Х ^ ™ 450 нм. Измерения проводили с

3.5. Ферментативное генерирование супероксид анион-радикала (V в системе ксантин/ксантиноксидаза Оценку способности соединений нейтрализовывать супероксид анионрадикал 02'~, генерируемый в ферментативной системе ксантин/ксантиноксидаза, проводили по скорости восстановления тетразолия синего до формазана [131]. Реакционная смесь содержала

2.7 мл 40 • 10"3 моль • л"1 карбонатного буфера (рН

10.0,

0.1 • 10"3 моль • л"1 ЭДТА),

0.06 мл 10 • 10" моль

3.6. Оценка способности соединений реагировать с гидроксильньш радикалом, генерированном в реакции Фентона Активность исследуемых соединений в реакции с гидроксильньш радикалом ОН изучали в процессе окислительной деструкции дезоксирибозы при действии гидроксильного радикала с образованием малонового диальдегида [132, 164]. Гидроксильньш радикал генерировали в реакции Fe2+ с пероксидом водорода. Последующее определение концентрации малонового диальдегида проводилось по методу ТБК-реагирующих п

3.7. Определение антиоксидантной активности по способности соединений взаимодействовать с Н2О2 В эксперименте по оценке реакционной способности исследуемых соединений по отношению к пероксиду водорода [133, 165] реакционная смесь содержала

0.1 мл 30 мМ раствора Н 2 0 2 в фосфатном буфере (рН

7.4) и

0.12 мл ксантиноксидазы (

0.04

ед) и измеряли оптическую плотность при X ^ 293 нм

0.1 мл раствора исследуемого вещества различной концентрации в этаноле. Реакци

3.8. Оценка антиоксидантной активности соединений в процессе ингибирования неферментативного псроксидного окисления линолевой кислоты Оценку влияния исследуемых соединений на процесс неферментативного пероксидного окисления линолевой кислоты проводили с использованием соли Fe в качестве инициатора окисления [134, 166, 167]. К 34 цл линолевой кислоты в

1.97 мл этанола добавляли 2 мл фосфатного буфера (рН

7.4). Реакционная смесь содержала

0.33 мл раствора линолевой кислоты,

3.9. Оценка антиоксидаитной активности соединений в процессе ингибирования окисления олеиновой кислоты В колбу помещали 0,5 мл олеиновой кислоты, 6 мл СНС13, 9 мл ледяной уксусной кислоты и 0,5 мл свежеприготовленного на холоду насыщенного раствора KI и встряхивали в течение 2 мин, затем добавляли 50 мл дистиллированной воды и 0,5 мл 1% раствора крахмала и немедленно титровали 0,01М раствором Na2S203. Иод, выделившийся в эквивалентном гидр опер оксиду (LOOH) количестве, титровали стандартным

Определение спектрофотометрически. линолевой кислоты активности Измеряли липоксигеназы содержание продукта гидропероксида проводили окисления (9- и 13- соответствующего гидропероксиоктадекадиеновой кислоты) при A™ax 234 нм [168, 169]. Анализируемый раствор содержал 2 мл раствора линолевой кислоты (

0.3 • 10" моль • л"1),

0.89 мл боратного буфера (рН

9.0) и

0.01 мл раствора соединения в ДМСО. Реакцию запускали добавлением

0.1 мл раствора фермента (5

Определение кинетических параметров и типа ингибирования липоксигеназы проводили согласно известной методике [170], изменяя концентрацию линолевой кислоты в диапазоне (10-1000) • 10'6 моль • л"1 в присутствии неизменной концентрации ингибитора, близкой к значению IC50 для данного соединения. Значения кинетических параметров К т (константа Михаэлиса) и Vmax (скорость реакции при насыщении фермента субстратом) определяли графически в координатах Лайнуивера—Берка (метод двойных обратных коо

3.12. Оценка антноксидантной активности соединений в процессе ингибирования окислительной деструкции липосом Липосомы in vitro. Малые одноламеллярные (однослойные) липосомы из фосфатидилхолина (ФХ) и 1,Г,2,2'-тетраолеоилкардиолипина (КЛ) получали методом озвучивания. Раствор ФХ смешивали с необходимым количеством были использованы в качестве моделей клеточных и митохондриальных мембран для изучения пероксидного окисления липидов метанольного раствора КЛ и тщательно удаляли органический раст

3.13. Оценка антиокендантной активности соединений в процессе ингнбирования in vitro ПОЛ Митохондрии выделяли из печени или мозга самцов крыс линии Wistar, выращенных в виварии Института физиологически активных веществ РАН. За 18-20 ч перед началом эксперимента крыс лишали еды, но доступ к воде был не ограничен. Митохондрии печени крыс выделяли дифференциального различных буферов центрифугирования выделения для по стандартной но с методике набухания [171], использованием продуктов проводили с