Низкая цена
Всего 249a за скачивание одной диссертации
Скидки
75 диссертаций за 4900a по акции. Подробнее
О проекте

Электронная библиотека диссертаций — нашли диссертацию, посмотрели оглавление или любые страницы за 3 рубля за страницу, пополнили баланс и скачали диссертацию.

Я впервые на сайте

Отзывы о нас

Структура и генетика биосинтеза О-антигенов энтеробактерий рода Providencia : диссертация ... кандидата химических наук : 02.00.10, 03.01.03

Год: 2013

Номер работы: 2140

Автор:

Стоимость работы: 249 e

Без учета скидки. Вы получаете файл формата pdf

Оглавление и несколько страниц
Бесплатно

Вы получаете первые страницы диссертации в формате txt

Читать онлайн
постранично
Платно

Просмотр 1 страницы = 3 руб



Оглавление диссертации:

Окрашивание по Граму позволяет дифференцировать два основных типа клеточной стенки бактерий, которые характерны для грамположительных и грамотрицательных бактерий, дающих темно-синюю или красную окраску, соответственно. Оба типа бактерий имеют внутреннюю (цитоплазматическую) мембрану и пептидогликановый (муреиновый) каркас. Внутренняя мембрана - полупроницаемый барьер, окружающий цитоплазму и состоящий из фосфолипидного бислоя. Она регулирует транспорт веществ, в ней осуществляются процессы д

2.2 Биосинтез нуклеотидных предшественников Сахаров Субстратами для гликозилтрансфераз, переносящих моносахаридные остатки на невосстанавливающий конец растущей молекулы олигоили полисахарида, присоединенной к липидному носителю, являются нуклеотидные производные моносахаридов. Различные сахара активируются в виде нуклеозидмонофосфатов или нуклеозиддифосфатов (НДФ-сахаров), 13 синтезируемых из нуклеозидтрифосфатов (НТФ) и свободных моносахаридов или их 1-фосфатов, соответственно. Гены для син

Девятистадийный синтез гликолипида, состоящего из липида А с двумя присоединенными остатками Kdo (Клюг-липида А), происходит на цитоплазматической стороне внутренней мембраны. Он называется путем Рэйтца по имени ученого, внесшего наибольший вклад в его выяснение [51, 52]. Биоинформатический анализ показывает, что гомологи ферментов, участвующих на первых семи стадиях, имеются у всех грамотрицательных бактерий, что говорит о высокой степени консерватизма этого пути. В то же время наблюдается

Большинство генов, вовлеченных в синтез О-антигена, сгруппированы в один кластер, который обычно располагается на хромосоме, хотя известны примеры, когда отдельные гены или весь кластер целиком находится на плазмиде, как в S. enterica 054 [77]. Генный кластер О-антигена (ГКО) кодирует ферменты для синтеза нуклеотидных предшественников специфических компонентов данного О-полисахарида (раздел

2.2), гликозилтрансферазы для переноса моносахаридов и белки процессинга, необходимые для сборки/

2.5 Лигирование и экспорт липополисахарида на внешнюю мембрану

2.5.1 Лигирование После экспорта на периплазматическую сторону внутренней мембраны по независимым путям UndPP-связанный О-антиген и кор-липид А соединяются в полную молекулу ЛПС с высвобождением UndPP. Лигирование катализируется О-антиген-лигазой WaaL интегральным мембранным белком, который обычно кодируется в кластере генов waa, содержащем гены пути биосинтеза кора. В отличие от мутации по гену msbA, летальной для большинст

Бактерии рода Providencia семейства Enterobacteriaceae обитают в почве, сточных водах и загрязненных водоемах; их также выделяют из широкого крута живых организмов. Эти условнопатогенные микроорганизмы способны вызывать острые кишечные и урологические заболевания, инфицируя чаще всего маленьких детей и больных, чья иммунная система ослаблена в результате хирургических операций или ожогов. Первое описание этих бактерий в 1920 г. принадлежит Ornstein, который назвал их Bacillus inconstans. В 1

Данный раздел посвящен структурному исследованию О-полисахаридов (ОПС) типовых штаммов 23 О-серогрупп Providencia из Венгерской национальной коллекции медицинских бактерий. После характеристики общих подходов к структурному анализу (раздел

3.2.1) в разделе

3.2.

2.1 в качестве примера подробно описано установление строения фосфатсодержащего ОПС P. alcalifaciens 022. Далее для остальных ОПС рассмотрены особенности их структурного анализа, в основном связанные с присутствием не

ЛПС выделяли из бактериальных клеток водно-фенольной экстракцией по методу Вестфаля. Для структурных исследований ОПС, свободный от липида А, получали мягким кислотным гидролизом ЛПС, расщепляющим кетозидные связи присутствующих в коре остатков 3-дезокси-э-.мшш0-окт-2-улозоновой кислоты (Kdo), включая связь между кором и липидной частью. В случае присутствия в ОПС кислотолабильных Сахаров дополнительно проводилась мягкая щелочная деградация ЛПС, приводящая к отщеплению О-связанных жирных кисл

3.2.

2.1 P. alcalifaciens 022 [22] ЛПС гидролизовали 2% уксусной кислотой при 100 °С до выпадения осадка липидаА. Фракционированием супернатанта гель-хроматографией на колонке с гелем Sephadex G-50 получен высокомолекулярной ОПС и две олигосахаридные фракции, соответствующие кору (фракция

Б) и кору с одним присоединенным О-звеном (фракция А). Полный кислотный гидролиз ОПС с последующим превращением высвободившихся моносахаридов в ацетаты полиолов и анализом методом ГЖХ выяв

Гены синтеза специфических моносахаридных компонентов О-антигенов являются наболее консервативными из генов, входящих в генный кластер О-антигена (ГКО), и имеют высокую степень гомологии между бактериями независимо от их таксономического положения. Благодаря этому такие гены могут использоваться для локализации ГКО путем обнаружения открытых рамок считывания (ОРС), гомологичных к таким бактериям относились и провиденсии. К началу нашей работы были полностью секвенированы геномы двух штаммов P

3.3.

2.1 Гены биосинтеза нуклеотидных предшественников моносахаридов Пути биосинтеза специфических моносахаридных компонентов О-антигенов Providencia с секвенированными ГКО представлены на рис.

3.28. Гены синтеза нуклеотидных предшественников распространенных Сахаров (UDP-Glc, UDP-GlcNAc и ADP-Rib) являются генами "домашнего хозяйства" и не дублируются в ГКО. Предшественники UDP-Gal и UDP-GalNAc синтезируются путем обратимой 4-эпимеризации UDP-Glc и UDP-GlcNAc, к

3.3.3 Биохимическое подтверждение функций генов биосинтеза GDP-колитозы В отличие от остальных исследованных О-серогрупп ГКО серогруппы 039 не отвечал структуре О-антигена. В частности, анализ ГКО штамма этой О-серогруппы не выявил генов rmlA, rmlB, vioA, необходимых для синтеза dTDP-D-Qui4N, и гена gnu для синтеза UndPP-GalNAc предшественников моносахаридных компонентов О-антигена. Вместо этого присутствовали 92 гомологи генов тапВ, тапС и gmd, указывавшие на то, что другой или другие предше

К настоящему времени получены ЛПС 56 из 59 О-серогрупп Providencia, представленных в Венгерской национальной коллекции медицинских бактерий (из 62 серогрупп Ewing 058 и 059 перенесены в род Morganella, а 062 в коллекции отсутствовала). Штаммы 14 серогрупп (01,010, 013, 015, 017, 037, 041, 042, 050, 053-056, 061) были лишены поверхностных полисахаридов, в том числе ОПС. Таким образом, их ЛПС находились в R-форме, что, повидимому, явилось следствием S-^R-диссоциации бактерий при длительном хран

Внутриродовые О-антигенные связи Providencia были систематически изучены в работах Ewing и соавт., Penner и соавт. и Левиной и соавт. (таблица

4.3). Результаты, полученные группами Penner и Левиной, лучше согласуются между собой, что очевидно объясняется большей чувствительностью реакции пассивной гемагглютинации, использовавшейся этими группами, по сравнению с применяемой Ewing и соавт. реакцией агглютинации в пробирке. В более поздних работах применялись ферментный иммуносорбентный ан

Штаммы Providencia получены из Венгерской национальной коллекции медицинских бактерий (HNCMB, Национальный институт гигиены, Будапешт). Выращивание бактерий проводились в Институте микробиологии, биотехнологии и иммунологии Университета Лодзи (Польша) в лаборатории профессора A. Rozalski. Клетки культивировали в триптон-соевом бульоне с добавлением 0,6% дрожжевого экстракта при 37 °С и постоянной аэрации. В конце логарифмической фазы роста бактерии убивали обработкой раствором фенола (1,5 мл

5.2.1 Выделение липополисахаридов ЛПС выделяли из сухих клеток экстракцией горячим 45% водным фенолом по методу Вестфаля [202], фенол удаляли диализом экстракта без разделения слоев и отделяли клетки центрифугированием. Сырые препараты ЛПС очищали осаждением нуклеиновых кислот и белков подкислением супернатанта до рН 2 добавлением 50% водной CCI3CO2H при 4 °С. Осадок отделяли центрифугированием, супернатант диализовали против дистиллированной воды, лиофилизовали и получали очищенные пр

5.3.1 Определение состава полисахаридов газо-жидкостной хроматографией Нейтральные и аминосахара определяли методом ГЖХ в виде ацетилированных полиолов [203]. Полисахариды (0,5

мг) гидролизовали в герметично закрытом контейнере 2 М CF3C02H (0,5 мл, 120 °С, 2

ч) или 10 М НС1 (80 °С, 30 мин); для определения колитозы использовали более мягкие условия гидролиза (1 М CF3COOH, 120 °С, 2 ч). Кислоту удаляли током воздуха, остаток растворяли в воде (0,5 мл), которую затем удаляли