Низкая цена
Всего 249a за скачивание одной диссертации
Скидки
75 диссертаций за 4900a по акции. Подробнее
О проекте

Электронная библиотека диссертаций — нашли диссертацию, посмотрели оглавление или любые страницы за 3 рубля за страницу, пополнили баланс и скачали диссертацию.

Я впервые на сайте

Отзывы о нас

Свойства митохондриальной циклоспорин А-нечувствительной пальмитат/Ca2+-активируемой поры и ее возможная роль в активации апоптоза : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.04

Год: 2005

Номер работы: 64114

Автор:

Стоимость работы: 249 e

Без учета скидки. Вы получаете файл формата pdf

Оглавление и несколько страниц
Бесплатно

Вы получаете первые страницы диссертации в формате txt

Читать онлайн
постранично
Платно

Просмотр 1 страницы = 3 руб



Оглавление диссертации:

1.1. Роль митохондрий в регуляции Са^* гомеостаза клетки. Митохондриальные Са^*-транспортируюш,ие системы Ионы кальщ1я иницгофуют целый ряд клеточных процессов, вьшолняя роль вторичных мессенджеров в передаче информации клетке из окружающей среды (Berridge, 1993). Способность С^^ внутриклеточные высокого концентрация процессы; обеспечивается градиента в покоящихся концентрационного Са^*^ между регулировать где на прежде всего наличием цитозолем, поддерживается клетках субмикромолярном уровн

1.1.1. Митохондриальные системы входа Са^* Способность митохондрий накапливать кальций связана с налившем на их внутренней мембране электрохимического градиента протонов (Mitchell, 1966). Было показано, что вход кальция в митохондрии осуществляется электрофоретически за счет работы унипортера, а не происходит по механизму антипорта или симпорта, (Scapra and Azzone, 1970). Помимо Са^\ унипортер способен осуществлять перенос других двухвалентных катионов - Sr^*^, Мп^\ Ва^\ лантаноидов, но не M

1.1.2. Митохондриальные системы выхода Са^* В митохондриях существуют две различные системы выхода Ga^^ Na^-зависимая и Na^-независимая. Ма*-зависимый путь выхода Ga^^ бьш обнаружен в митохондриях возбудимых тканей (Grompton et al., 1978; Gmiter et al., 1994). Показано, что после добавления рутениевого красного, скорость выхода Ga^' стимулируется добавкой Na"^ (Grompton et al., 1978). Бьшо сделано предположение, что выход Ga'*^ происходит через Ga^7nNa*-o6MeHHHK. Кинетические параметры

1.2. Митохондриальные Са^''-зависимые поры Одним из основных постулатов хемиосмотической5 теории является строгая избирательная проницаемость внутренней митохондриальной мембраны (NichoUs and Ferguson, 2002). Благодаря этому свойству мембраны, вещества, которые не переносятся специальными транспортными системами, не могут попасть в митохондриальный матрикс. Избирательная проницаемость митохондриальной мембраны может быть нарушена активацией свободно-радикальных процессов, затрагивающих липидн

/.

2.1.1. Общая характеристика Известно, что открытие митохондриальной поры происходит при накоплении в матриксе митохондрий Са^"^, но концентрация катиона, вызьшающая; открытие поры, сильно зависит от условий; эксперимента (Zoratti and Szabo, 1995; Halestrap et al., 2002). Необходимость аккумуляции C^* в матриксе была продемонстрирована в экспериментах с использованием специфического ингибитора кальциевого унипортера рутениевого красного (Hunter and Haworth, 1979а). Было установле

2.1. Выделение митохондрий из печени крыс Митохондрии вьщеляли из печени половозрелых белых крыс линии WIstar весом 220-250 г общепринятым методом дифференциального центрифугирования. Среда выделения содержала 210 мМ маннитол, 70 мМ сахарозу, 1 мМ ЭДТА, 10 мМ! Hepes-KOH, рН

7.4. Охлажденную в среде выделения печень отмывали от крови, продавливали: через пресс с диаметром отверстий ~ 1 мм, а затем гомогенизировали тефлоновым пестиком в стеклянном гомогенизаторе Поттера (соотношение массы

Набухание митохондрий регистрировали по изменению оптической плотности суспензии митохондрий (А) при длине волны 540 им при постоянном перемешивании и термостатировании при 25°С на спектрометрической оптоволоконной оптической системе «Ocean Optics USB 2000» («Ocean Optics, Inc», США). Среда инкубации содержала 210 мМ маннитол, 70 мМ сахарозу, 5 мМ янтарную кислоту, 5 мкМ ЭГТА, 36 I мкМ ротенон, мМ Hepes-KOH, рН

7.4. Концентрация митохондриального белка в кювете

0.4 -

0

^ Пробы митохондрий для электронно-микроскопического непосредственно из среды исследования инкубации в Концентрация митохондриального белка в кювете I мг/мл. В некоторых отбирались соответствующих экспериментальных условиях и фиксировались в

2.5% растворе глутарового альдегида на среде инкубации (рН:

7.4) в течение 2 часов. После постфиксации в 1% растворе Os04 образцы заливали в эпоксидную смолу Эпон 812. Срезы препаратов делали на ультрамикротоме LICB III. Окрашивали срезы сви

Для оценки выхода цитохрома с митохондрии инкубировали в концентрации 3 мг/мл в различных экспериментальных условиях. После этого митохондрии осаждали в течение 3 мин при 10000 g. Отбирали 10 мкл супернатанта, а осадок ресуспендировали в 1 мл среды инкубации и отбирали также 10 мкл. Фракционирование белков проводили с помощью SDS-PAAG (12% гель) электрофореза при 200 V с последующим переносом на нитроцеллюлозную мембрану в течение 2 часов при 80 V, Мембрана блокировалась в i течение часа 2% о

2.5. Формирование однослойных липосом Однослойные липосомы, загруженные сульфородамином Б, формировали общепринятым; методом экструзии. 5 мг сухого азолектина гидратировали в

0.5 мл буфера в течение 5 мкМ ЭГТА, 50 мМ сульфородамин Б. нескольких часов с После II 5 циклов периодическим помешиванием. Состав буфера: 10 мМ Трис-НС1 (рН

8.5), замораживания/оттаивания при температзфе -10/+25°G соответственно, суспензия многослойных липосом была продавлена микроэкструдера «Avanti» («Avan