Низкая цена
Всего 249a за скачивание одной диссертации
Скидки
75 диссертаций за 4900a по акции. Подробнее
О проекте

Электронная библиотека диссертаций — нашли диссертацию, посмотрели оглавление или любые страницы за 3 рубля за страницу, пополнили баланс и скачали диссертацию.

Я впервые на сайте

Отзывы о нас

Роль аминокислотных повторов прионного домена белка Sup35 в вариабельности цитоплазматического детерминанта (PSI+) дрожжей Saccharomyces cerevisiae : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03

Год: 2006

Номер работы: 71717

Автор:

Стоимость работы: 249 e

Без учета скидки. Вы получаете файл формата pdf

Оглавление и несколько страниц
Бесплатно

Вы получаете первые страницы диссертации в формате txt

Читать онлайн
постранично
Платно

Просмотр 1 страницы = 3 руб



Оглавление диссертации:

аллелей гена SUP35, кодирующих белки с укороченными областями NR нрионного домена, в штаммы [PSt}, несущие аллель SUP35 дикого типа, приводит к изменению супрессорного фенотипа и потере [PSt]

1.2. Эффективность встраивания мутантных белков Sup35 в прионные полимеры, образованные полноразмерным Sup35, зависит от длины области NR прионпого домена и от варианта [PSt]

1.2,1.Разделение агрегированной и растворимой форм белка Sup35 с помощью ультрацентрифугирования 83 83 75

1.2.2.

Эффективность передачи прионного состояния от полноразмерного белка Sup35 к мутантному варианту Sup35 зависит от длины области NR прионного домена белка и от варианта [PSt]

2.2. Замена полноразмерного белка Sup35 мутантными вариантами Sup35 приводит к ослаблению супрессорного фенотипа [PSt] и уменьшению его стабильности 3. «Сильный» вариант [PSt^] не ноддержнвается белком Sup35 с четырьмя амннокнслотными новторами в прионном домене 4. Термостабильность нриоиных нолимеров белка Sup35 раз

1.1. Прионы - инфекционные агенты нового типа Прионы белки, обладающие свойством инфекционности. Прионные заболевания животных и человека относят к «конформационным» болезням. Такие болезни вызваны нарушением нроцессов формирования нространственной структуры некоторых белков, приводящим к изменениям клеточной физиологии. Наряду с нрионными болезнями к «конформационным» также относят амилоидные заболевания, такие как болезни Альцгеймера, Хангтингтона и Паркинсона. При амилоидных и нрионных за

На основании имевшихся к 1982 году экспериментальных данных Прузинер сформулировал прионную концепцию. Эта концепция подразумевала следующее: • инфекционным агентом является белок РгР^" • инфекционный агент РгР^*^ может реплицировать себя в отсутствие нуклеиновой кислоты • превращение белка из нормальной формы (РгР^) в патологическую (РгР^*^) происходит путём конформационного перехода • конформационный переход РгР*^ в РгР^'^ может происходить спонтанно, приводя к спорадическим формам при

1.3. Доказательства прионной гипотезы К настоящему времени концепция прионов получила убедительные экспериментальные подтверждения. Если размножение РгР^*' после попадания в организм происходит путём наведения патологической конформации на РгР , то организмы, лищённые РгР^, должны быть устойчивы к прионной инфекции. Это и было показано с использованием трансгенных мыщей, гомозиготных по делеции гена Ргпр '^^'^).

Введение гомогената мозга мыщей, больных скрэйпи, трансгенным мыщам не при

1.4, Мемсвидовая передача прионной инфекции Передача нрионной инфекции между разными видами млекопитающих затруднена (Pattison, 1965). Как правило, губчатые энцефалопатии передаются между особями одного вида или к особям близкородственных видов. Например, болезнь Крейцфельда-Якоба нередаётся от человека человеку, и от человека шимпанзе; скрэйпи же нередаётся среди овец и коз, но не передаётся шимпанзе. Также неизвестны случаи заражения человека прионами овец (скрэйни) (Prusiner, 1982). В то

Штаммовое разнообразие является одним из фундаментальных свойств прионов. Оно связано со способностью прионного белка приобретать и наводить различные прионные конформации. Последовательность аминокислот в белке РгР определяет набор конформации, которые он может приобрести. Если наборы допустимых конформации приона у двух различных видов организмов пересекаются, то может происходить преодоление межвидового барьера (Hill et al., 1997). Размножаясь, белки РгР с различными конформациями обуславл

1.6. Механизмы прионного перехода На сегоднящний день прионную гипотезу можно считать доказанной. Однако остаётся неясным механизм превращения РгР -> РгР . Было предложено несколько моделей прионного перехода. Согласно гетеродимериой модели (Pmsiner, 1991) прионное состояние присуще мономеру белка РгР, и физическое взаимодействие РгР^'' с ^ катализирует превращение РгР^ -> РгР^'' (Рис. 1 А). При этом спонтанный переход -> РгР^'^ маловероятен из-за высокого энергетического барьера. П

[URE3] был описан в 60-70-х годах как доминантный нехромосомно наследуемый генетический элемент (Lacroute, 1971). В 1994 г. бьша высказана гипотеза о том, что детерминант [URE3] поддерживается благодаря автокаталитическому 1994). [URE3'\ воспроизведению альтернативных состояний белка Ure2 (Wickner, полностью соответствует критериям приона дрожжей. Детерминант [URE3] может быгь элиминирован с помощью гидрохлорида гуанидина (ГХГ) вещества, вызывающего денатурацию белков, хотя для элиминации

В отличие от белка Ure2 5*. cerevisiae переход в прионное состояние белка ПЕТ-s мицелиального гриба Р. anserina не связан с инактивацией. Напротив, только в прионной форме белок HET-s способен в вызывать реакцию вегетативной клеток, несовместимости, выражающуюся гибели гетерокариотических образующихся при парасексуальном процессе (Coustou et al., 1997). Колония гриба Р. anserina представляет собой синцитий, в котором клетки могут обмениваться цитоплазмой и даже ядрами. Гифы двух колоний

2.4. Прион [PStjS. cerevisiae Детерминант [PSt] впервые был описан как фактор, приводящий к увеличению эффективности слабого охр супрессора SUQ5, который кодирует серин-специфичную тРНК с антикодоном, комплементарным нонсенс-кодону UAA (Сох, 1965). Позднее выяснили, что [PSt] повышает эффективность прочтения всех трёх нонсенс кодонов (Liebman and Sherman, 1979). Вскоре были обнаружены супрессорные мутации в гене SUP35, которые подобно [PSI*] обуславливали омнипотентную супрессию, то есть супр

Белок Sup35 состоит из трёх районов (Рис.

4) (Ter-Avanesyan et al., 1993). Его аминоконцевой район, обозначенный N (1-123 а. к.), имеет необычный аминокислотный состав, так как содержит более 50% аспарагиновых и глутаминовых остатков. Этот домен необходим для поддержания прионного состояния Sup35, и поэтому часто называется PrD (Рпоп forming Domain). Делеционные аллели гена SUP35, не кодирующие аминоконцевую последовательность, не поддерживают (Ter-Avanesyan et al, 1994). Кроме того, в

Детерминант \PSt'[ полностью удовлетворяет всем генетическим критериям приона дрожжей. Действительно, {PSt'\ теряется с высокой частотой в присутствии немутагенных агентов, таких как ГХГ (3-5 т М ) и метанол (Tuite et al., 1981). [PSt} может возникать вновь в штаммах, в которых существовал ранее и был изгнан (Lund and Сох, 1981). [PSt] возникает de novo с частотой 1 на 10^ клеток. Сверхпродукция Sup35 или его прионного домена увеличивает частоту возникновения [PS/] в 100 и более раз (Chemof

2.4.3. Возникновение [PSt] de novo, прион [PIN^J [PSt] может возникать de novo при сверхэкспрессии Sup35 не у всех щтаммов S. cerevisiae. Необходимым условием возникновения [PSt] de novo является присутствие эпигенетического элемента, названного [Р11\Г] ([PSl*] inducibility) (Derkatch et al., 1997). Однако, если [PSI^] уже существует, [PIN^] не требуется для его поддержания (Derkatch et al., 2000). Появление [PIIsT] в клетке связано с переходом белка Rnql с неизвестной функцией в агрегирова

2.4.4. Роль шаперонов в возникновении и наследовании прионову дроэюэюей Удивительным свойством прионов дрожжей является их способность стабильно поддерживаться в делящихся клетках. Известно, что наличию детерминанта [PSt] соответствует агрегированное состояние белка Sup35 (Paushkin et al., 1996; Patino et al., 1996). В этой связи возникают вопросы, каким образом наследуются такие агрегаты, и являются ли они единицами наследования {PSt]. Очевидно, что для того, чтобы прион стабильно поддержив

2.4.5. Межвидовая передача прионных свойств Sup35 и механизмы изгнания [PSt] Прионный домен Sup35 можно разделить на две области NQ и NR, отличающиеся по структуре и функции. Район, обозначенный NQ (с 1 по 40 а. к.) обогащен аспарагиновыми и глутаминовыми остатками. Второй район, NR (с 41 по 97 а. к.) содержит пять полных и одну неполную копию аминокислотных повторов с консенсусной последовательностью PQGGYQQ(Q)YN. Мутации в гене SUP35, вызывающие потери [PSf] (мутации PNM), или интерферирую

2.4.6. Варианты [PSt] Как отмечено выше, штаммовое разнообразие является одним из основных свойств прионов. Феномен вариабельности прионов проявляется в полной мере и у прионов дрожжей. Варианты {PSt] Штаммы прионов дрожжей обычно называют вариантами. отличаются по митотической стабильности и силе супрессорного фенотипа (Derkatch et al., 1996) (Рис. 10). Варианты {PSt], обладающие высокой митотической стабильностью, и обеспечивающие выраженную супрессию нонсенс мутаций, назьтают «сильными»