Низкая цена
Всего 249a за скачивание одной диссертации
Скидки
75 диссертаций за 4900a по акции. Подробнее
О проекте

Электронная библиотека диссертаций — нашли диссертацию, посмотрели оглавление или любые страницы за 3 рубля за страницу, пополнили баланс и скачали диссертацию.

Я впервые на сайте

Отзывы о нас

Идентификация и характеристика плазмид бактерий-деструкторов хлорфеноксиуксусных кислот : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03

Год: 2005

Номер работы: 71503

Автор:

Стоимость работы: 249 e

Без учета скидки. Вы получаете файл формата pdf

Оглавление и несколько страниц
Бесплатно

Вы получаете первые страницы диссертации в формате txt

Читать онлайн
постранично
Платно

Просмотр 1 страницы = 3 руб



Оглавление диссертации:

Актуальность проблемы. Известно, что современная практическая деятельность человека сопровождается непрерывным поступлением в биосферу фосфора. токсичных Среди синтетических соединений, группы которые трудно включаются в элементарные циклы обмена углерода, азота, серы и этой многочисленной приоритетными глобальными загрязнителями являются хлорсодержащие органические производные. Они обнаруживаются во всех объектах живой и неживой природы: в атмосферных осадках, в океанах, в почвах заповеднико

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Структурно-функциональные особенности организации плазмид биодеградации

Бактериальные плазмиды это внехромосомные репликации. генетические плазмиды элементы, способные к автономной Обычно представлены молекулами ДНК закрытой кольцевой формы, размер которых варьирует в пределах от 1,5 до 200 МДа и более (1500-400000 п.н.), Плазмиды, как правило, содержат генетическую информацию, которая по определению не является жизненно необходимой для бактерий - хозяев. Но именно они способны придать клеткам бактерий свойства, обеспечивающие их выживание в определенных услов

1.2. Особенности организации катаболической плазм иды pJP4 Alcaligenes eutrophus JMP134 Плазмида pJP4 - катаболическая низкокопийная плазмида штамма Alcaligenes eutrophus JMP134 (Ralstonia eutropha JMP134) [Don, Pemberton, 1981]. Ha данной плазмиде были локализованы гены деградации 2,4-Д и 3хлорбензола [Perkins et al., 1990; Perez-Pantoja et al., 2000, 2003]. Плазмида pJP4 кодирует устойчивость к хлориду ртути и фенилмеркурийацетату. При использовании приемов клонирования, мутагенеза транспоз

Плазмида pROlOl является производной pJP4, полученной путем инсерции Тп 1721 в несущественный участок pJP4. Эта плазмида была перенесена путем конъюгации в несколько штаммов Pseudomonas и А. eutrophus АЕО106. Трансконъюгаты АЕО106 (pROlOl) и некоторые трансконъюгаты Pseudomonas были способны к росту на 2,4-Д. Трансконъюгаты с кодируемыми хромосомами гидролазами фенола также деградировали феноксиуксусную кислоту в присутствии индуктора, а именно 2,4-Д или 3-хлорбензола. Мутант одного такого фе

1.3. Другие плазмиды биодеградации ксенобиотиков Е. Vedler с соавторами выделили штамм бактерии Achromobacter xylosoxidans subsp. denitrificans EST4002 деградирующий гербицид 2,4-Д. Было показано, что он содержит плазмиду pEST4011. Эта плазмида гарантирует ее хозяину устойчивый 2,4-Д (+) фенотип. Была определена полная нуклеотидная последовательность pEST4011 длиной 76,958 т.п.н. Авторы указали на то, что плазмида является производным очень нестабильного лабораторного предка pEST4011 длиной 9

К важным свойствам плазмид биодеградации была отнесена возможность их функционирования в различных клетках-хозяевах. Передача плазмид повышала адаптивный потенциал бактерий, несущих плазмиду, и способствовала их выживанию в присутствии ксенобиотиков. В ряде исследований было показано, что плазмида pJP4 обладает трансмиссивностью. Плазмида pJP4 была способна формировать пул экстрахромосомной ДНК, распространяемой между популяциями. J.W. Neilson и соавторы наблюдали конъюгативный перенос pJP4

Объектами исследований служили природные штаммы бактерий, выделенные из смешанных популяций микроорганизмов промзоны химического и нефтехимического производства г, Уфы, а именно, культуры IBRB-36 4СРА, IBRB-21SG и IBRB-22S.

2.2.1. Идентификация штаммов по признакам морфологической, морфометрической, физиологической и биохимической дифференциации Идентификацию культур по физиолого-биохимическим признакам проводили согласно принципам руководства «Определитель бактерий Берджи» [1997]. Для определения основных морфологических и морфометрических характеристик клеток и структурно-популяционных особенностей использовали микробных популяций исследуемых штаммов бактерий современные методы просвечивающей электронной мик

Посевной бактериальный материал получали культур в разбавленном МПБ (1МПБ: ТНгО) при выращивании с добавлением хлорфеноксиуксусных кислот до конечной концентрации 100 мг/л при температуре 30°С. Полученный посевной материал высевали в количестве 0,01% от объема в жидкую питательную среду, содержащую в г/л: NH4CI - 1, К2НРО4 - 5, MgS04-7H20 - 0,05, FeS04-7H20 - 0,005, CuS04-5H20 -0,001, ZnS04 - 0,0008, 2,4,5-Т - 0,1. рН среды доводили до 6,8-7,0. Материал культивировали в термостатированных у

Определение определения микроколичеств количества хлорфеноксиуксусных пестицидов [Методы кислот в культуральной жидкости проводили используя модифицированные методы микроколичеств пестицидов, определения пробы 1984]. Для анализов отбирали культуральной жидкости объемом 10 мл. Клетки штамма удаляли из проб центрифугированием в течение 30 мин при 5 тыс. об/мин. Затем рН жидкости доводили до 2,0, добавляя 1-2 капли 1н НС1. Далее из проб 3-кратно экстрагировали роторном хлорфеноксиуксусные

Для идентификации продуктов метаболизма 2,4,5-Т проводили отбор проб культуральной жидкости в ходе инкубации штаммов. Пробы освобождали от бактериальных клеток центрифугированием в течение 30 мин при 5 тыс. об/мин. Далее из проб 3-кратно экстрагировали равными объемами хлороформа и эфира 2,4,5-Т и продукты ее деградации. После экстракции хлороформ и эфир удаляли отгонкой на роторном вакуумном испарителе. Экстракты 2,4,5-Т и интермедиаты ее деградации метилировали свежеприготовленным подвергал

Выделение внехромосомных элементов бактерий проводили, применяя модифицированный метод щелочного лизиса [Маниатис с соавт., 1984; Методы общей бактериологии, 1990]. Предварительно проверяли условия лизиса клеток исследуемых штаммов, для чего клетки бактерий помещали на часовые стекла и обрабатывали лизирующими растворами, включая лизоцим в концентрации 10 мг/мл, раствор Brij, смесь 1% SDS и 0,2 М NaOH. Характер и степень лизиса оценивали визуально. Для выделения внехромосомных элементов биома

Фракционирование препаратов ДНК проводили методом электрофореза [Маниатис с соавт., 1984] в трис-ацетатном (ТАЕ) буфере, содержащим 15мМ ЭДТА, ЮОмМ СНзСООЫа, 400мМ Трис-НС1 с рН 7,5. Агарозный гель готовили из расчета 1 г агарозы на 100 мл раствора ТАЕ. Смесь нагревали на водяной бане (100°С) до гомогенного состояния. Затем раствор агарозы заливали в предварительно приготовленную плашку с гребенкой. После образования геля гребенку аккуратно удаляли и помещали пластину в камеру для электрофор