Низкая цена
Всего 249a за скачивание одной диссертации
Скидки
75 диссертаций за 4900a по акции. Подробнее
О проекте

Электронная библиотека диссертаций — нашли диссертацию, посмотрели оглавление или любые страницы за 3 рубля за страницу, пополнили баланс и скачали диссертацию.

Я впервые на сайте

Отзывы о нас

Каталитическое окисление миоглобина солями и комплексами меди и железа: кинетика и механизм : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.02

Год: 2005

Номер работы: 63357

Автор:

Стоимость работы: 249 e

Без учета скидки. Вы получаете файл формата pdf

Оглавление и несколько страниц
Бесплатно

Вы получаете первые страницы диссертации в формате txt

Читать онлайн
постранично
Платно

Просмотр 1 страницы = 3 руб



Оглавление диссертации:

. Реакции переноса электрона в биологических процессах, включая фиксацию азота, фотосинтез и окислительное фосфорилирование, важны для биоэнергетического баланса клеток. Несмотря на их фундаментальную значимость, адекватное понимание механизма многих редокс-реакций на сегодня отсутствует. Сложность биологически важных систем электронного транспорта побуждает к исследованию механизмов более простых реакций гемсодержащих белков с комплексами металлов, которые являются связ)аощим звеном между не

Цитохром С Митохондриальный цитохром С (104 аминокислоты,

12.3 кДа) является переносчиком электрона между Cyt С-редуктазой (комплекс III) и Cyt С-оксидазой (комплекс IV) дыхательной цепи. Пространственная структура Cyt С давно и хорошо изучена (Рис.

2.2), что стимулирует разнообразные исследования с участием этого гембелка. В окисленном и восстановленном белке лигандами Fe тема постоянно являются Hisl7 и MetSO и, кроме того, гемовая группа ковалентно связана тиоэфирными связями с

2.1.2. Окисление гемсодержащих белков ионами и комплексами двухвалентной меди Цитохром С Скорость окисления ферро-Cyt С различными соединениями меди зависит от редокспотенциала и природы комплекса, а также от наличия или отсутствия в среде Ог, так как восстановленная медь способна реокисляться кислородом, увеличивая концентрацию реагента [Davison, 1968; Davison и Hamilton, 1968; Augustin и Yandell, 1979]. Важным фактором является степень ассоциации реагента с белком до стадии переноса электро

Миоглобин кашалота (в мет-форме) вьщеляли из скелетных мышц экстракцией и фракционированием сульфатом аммония [Antonini и Вшпоп, 1971]. Индивидуальную фракцию IV получали 2-кратным фракционированием суммарного препарата ионообменной хроматографией на DEAE-целлюлозе и СМ-сефадексе С-25 [Постникова и др., 1982]. Метмиоглобин из сердца свиньи вьщеляли аналогичным образом [Postnikova и др., 1991; Постникова и др., 1992]. Миоглобин из сердца лошади фирмы «Sigma» (США) дополнительно фракционировали

. Определение изоионной точки (р1) интактных Mb кащалота, лошади и свиньи, химически модифицированных СМ-МЬ и СА-МЬ, а также мутантного Mb(Hisl 19->Asp) проводили с помощью изофокусирования в 5% полиакриламидном геле, содержащем амфолины в интервале рН 4-9 [Fesenko Е.Е. и др., 1979]. После разделения полосу геля, содержащую белок, вырезали и элюировали

2.5 мл бидистиллированной воды. Значение рН в эллюате определяли на рН-метре "ЭВ-74" с точностью ±

0.05 единиц рН. Ок

Значение рК мет-гидрокси-перехода и рН щелочной денатурации интактного метМЬ кашалота и мутантного MeT-Mb(Hisl 19->Asp) определяли титрованием белка в интервале рН

6.0 -

12.5 в

0.01 М трис-фосфатном буфере, 1:1, при 22°С. Регистрация велась по поглощению в полосе Соре.

Скорость окисления оксимиоглобина исследовали спектрофотометрически по изменению поглощения на полосе 543 или 581 нм на двухлучевом спектрофотометре Specord UV-VIS (Германия) с термостатированным кюветодержателем. Все эксперименты проводились при 20°С. Белок растворяли в трис-малатном буфере, 1:1, требуемой молярности и значения рН. Начальная концентрация миоглобина составляла

2.25-10"^ М. Для получения необходимых молярных соотношений МЬОг с реагентом в реакционную смесь добавляли

. Спектры ЯМР высокого разрешения регистрировали в лаборатории ЯМРисследований биосистем ИТЭБ РАН (рук. д.ф-м.н. В.П. Кутышенко) на спектрометре Bruker WM-400 и Broker AV-600 при комнатной температуре с использованием ячейки памяти 16К и 256 циклов накоплений для каждого эксперимента. Образцы готовили инкубацией мет-МЬ кашалота и лошади в ^НгО в течение 12 часов при 4°С в 10 мМ ацетатном буфере, рН

5.2 или 10 мМ трис-НС1 буфере, рН

7.1-

7.5. При рН

7.1-

7.5 в изм

4.1. Механизм окисления оксимиоглобина ионами и комплексами меди: карбоксиметилированный и карбоксиамидированный по остаткам гистидина миоглобины Как уже отмечалось, превращение MbOi в окисленную мет-форму, катализируемое ионами или комплексами двухвалентной меди, протекает по сайт-специфическому механизму и в образовании комплексов реагента с белком участвуют остатки гистидина. Ранее нами были изучены кинетики катализируемого ионами Си^'^ окисления гомологичных по пространственной структуре