Низкая цена
Всего 249a за скачивание одной диссертации
Скидки
75 диссертаций за 4900a по акции. Подробнее
О проекте

Электронная библиотека диссертаций — нашли диссертацию, посмотрели оглавление или любые страницы за 3 рубля за страницу, пополнили баланс и скачали диссертацию.

Я впервые на сайте

Отзывы о нас

Электрофизиологическое исследование механизмов действия эндогенных и экзогенных модуляторов ионотропных рецепторов в нейронах головного мозга : диссертация ... доктора биологических наук : 03.03.06 / Шаронова Ирина Николаевна; [Место защиты: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова"]

Год: 2015

Номер работы: 730527

Автор:

Стоимость работы: 249 e

Без учета скидки. Вы получаете файл формата pdf

Оглавление и несколько страниц
Бесплатно

Вы получаете первые страницы диссертации в формате txt

Читать онлайн
постранично
Платно

Просмотр 1 страницы = 3 руб



Оглавление диссертации:

Актуальность проблемы. Представление о химической передаче нервного импульса в нервной системе, возникшее в начале XX столетия (Elliott, 1905; Dixon, 1906; Dale, 1914), в настоящее время является ключевой основой теории функционирования центральной нервной системы (ЦНС). Химическая передача в синапсах признана в настоящее время главным механизмом связи между нейронами, 1964; обеспечивающим обработку информации в мозге (Eccles, млекопитающих быстрая Katz, 1966). В нервной системе пере

1.1. Общая характеристика и номенклатура лиганд-управляемых каналов нейрональной мембраны Лиганд-управляемые каналы (Ligand-gated ion channels - LGICs) представляют собой интегральные мембранные протеины, содержащие пору, что позволяет осуществлять селективную регуляцию потока ионов через плазматическую мембрану. Открывание канала происходит после связывания нейротрансмиттера, результатом который запускает конформационные изменения, состояние канала. LGICs которых является проводящее

Представление о глутамате как возбуждающем передатчике в ЦНС млекопитающих начало складываться в 1950-х годах. Было обнаружено возбуждающее нейроны действие L-глутамата и других кислых аминокислот на (Curtis et al., 1959). является В настоящее медиатором время для спинного мозга общепризнано, что L-глутамат основным осуществления быстрой возбуждающей нейронами позвоночных (Dingledine синаптической передачи et al., 1999). между с Исследования применением новых фармакологических инст

Гамма-аминомасляная тормозным медиатором кислота в мозге, (ГАМК), являющаяся основным осуществляет свои эффекты через ионотропные ГАМКА и метаботропные ГАМКБ рецепторы. Ионотропные ГАМКА рецепторы впервые были идентифицированы фармакологически как активируемые бикукуллином избирательным и агонистом и мусцимолом, модулируемые препаратами рецепторы, блокируемые пикротоксином бензодиазепинами, барбитуратами и некоторыми другими (Macdonald and Olsen, 1994; Sieghart, 1995). ГАМКБ рецептор

Аденозин 5'-трифосфат (АТФ) используется организмом как источник энергии практически при всех видах клеточной активности. Относительно недавно - во второй половине XX века стали накапливаться данные, свидетельствующие о том, что АТФ может выполнять также медиаторные функции. В 1972 Джефри Бернсток (Burnstock, 1972) опубликовал обзор, в котором привел многочисленные факты, свидетельствующие о том, что АТФ действует как неиромедиатор в вегетативной нервной системе и предложил называть рецепторы

Настоящая работа была выполнена на изолированных нейронах, выделенных из срезов различных структур мозга крысы (гиппокамп, стриатум, мозжечок, гипоталамус). Выделение нейронов из срезов 1991). в производили с помощью метода Регистрацию токов осуществляли вибродиссоциации (Vorobjev, с помощью пэтч-кламп метода конфигурации «целая клетка» (Hamill et al., 1981), подведение веществ - с помощью метода быстрой аппликации (Vorobjev et al., 1996). Правила содержания и ухода за экспериментальными

В работе использовали крыс линии Wistar обоего пола в возрасте 13-30 дней (в большинстве опытов 14-18 дней). Для приготовления срезов использовали две методики - с помощью ручного режущего устройства и с помощью вибратома устройство бритвенное было WPI VLSM (Великобритания). Ручное в лаборатории к режущее собой изготовлено и представляло стержню, лезвие, прикрепленное стальному который одновременно являлся сердечником катушки. Подача напряжения 10 В на катушку вызывало вибрацию стержня

Заготовки для микропипеток длиной около 70 мм с капилляром внутри, внутренним диаметром

1.4-

1.5 мм и внешним диаметром

1.6-

1.7 мм изготавливали из твердого боросиликатного стекла (пирекс). Заготовки вытягивали из трубок длиной

0.8 м, внешним диаметром 10 мм и внутренним диаметром 6 мм при помощи большой вертикальной кузницы (Narshige, Japan). Микропипетки вытягивали из заготовок в две стадии на горизонтальной микрокузнице PD-5 (Narishige, Japan) или с помощью

Клетки, выделенные из срезов, в течение нескольких секунд оседали на дно регистрационной камеры, где с помощью инвертированного микроскопа WPI проводили их поиск, идентификацию и оценку жизнеспособности. Выделенные пирамидные нейроны поля СА1 гиппокампа имели характерную треугольную или овальную форму с хорошо выраженным апикальным дендритом (Рисунок 18). Рисунок 18. Микрофотография изолированных нейронов поля СА1 гиппокампа, выделенных из срезов мозга 30-дн крысы с помощью метода вибродисс

Рабочая установка была собрана на металлической плите, вмонтированной в капитальную стену здания. На этой плите были закреплены все механические части установки - микроманипуляторы и микроскоп. В работе использовали инвертированный микроскоп, на столике которого крепилась камеры для выделения клеток и регистрации. Регистрируемый от нейрона сигнал преобразовывался на входном каскаде усилителя, представляющего собой I-V преобразователь, который находился 99 в корпусе усилитель измерительной го

Эксперимент начинали с заполнения системы для перфузии и аппликации индифферентным экстраклеточным раствором. Этот раствор наливали в сосуд, находящийся выше камеры для регистрации, откуда он через тонкую пластиковую трубочку поступал в желоб системы аппликации (см. ниже). Затем запускали программу, с помощью которой управляли подаваемыми на усилитель сигналами и вели запись электрической активности клетки. После выделения клеток из срезов в поле зрения микроскопа над заранее выбранной клетко

Для подведения агонистов ионотропных рецепторов и их модуляторов использовали систему для быстрой аппликации, разработанную в нашей лаборатории Воробьевым B.C. в сотрудничестве с автором настоящей работы (Vorobjev et al., 1996). В ходе выполнения настоящего исследования эта система претерпевала некоторые изменения, но принцип действия оставался тем же. Основу устройства составляют плексигласовый держатель с закрепленными в нем изогнутыми полиэтиленовыми трубочками для подачи апплицируемого в

Для регистрация токов и их последующего просмотра, а также измерения параметров ответов использовали программу, написанную в нашей лаборатории Воробьевым B.C. (в ее разных модификациях - dd07, dd08, L78D). Эта программа также дает возможность считывать данные после их записи на жесткий диск и экспортировать ответы в виде текстовых фалов для последующей обработки. Амплитуды ответов измеряли непосредственно с помощью этой программы, а статистическую первичных данных, построение обработку получе

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. МОДУЛЯТОРЫ ПОСТСИНАПТИЧЕСКИХ ГЛУТАМАТНЫХ РЕЦЕПТОРОВ

Гиппокамп является структурой, тесно связанной с процессами памяти. На обработку информации в гиппокампе в числе прочих влияют сигналы, поступающие из подкорковых структур. Аминергические волокна, включая катехоламинергические, серотонинергические и гистаминергические входы иннервируют основные клетки и интернейроны гиппокампа. Механизмы аминергической модуляции включают взаимодействие с большим числом мембранных каналов, что влияет на активность нейронов и пластические свойства синаптической

Ведущая роль глутаматных рецепторов NMDA типа в повреждениях нейронов, вызываемых повышением концентрации внеклеточного глутамата при многих патологических состояниях, диктует необходимость поиска эффективных и нетоксичных блокаторов этих рецепторов, которые могут быть использованы для снижения эксайтотоксичности. относятся, К таким всего, потенциально значимым нейропротекторам прежде канальные блокаторы этих рецепторов (Rogawski, 2000; Khodorov, 2004; Ehrnhoefer et al., 2011) Препарат и

Блокада NMDA каналов производными амилорида. Как уже указывалось ранее, интерес к антагонистам NMDA рецепторов связан с возможным их использованием в клинической практике для защиты нейронов от гибели при ишемии и гипоксии, а также как противосудорожных агентов. Однако многие известные ^ неконкурентные антагонисты, такие как кетамин, декстрометорфан и фенциклидин обладают галлюциногенными свойствами и вызывают другие нежелательные побочные эффекты. В связи с этим понятен интерес к поиску нов

Глутаматные рецепторы АМРА типа широко экспрессируются в разных типах нейронов в ЦНС, где они опосредуют быструю синаптическую передачу. АМРА рецептор представляет собой катион-проводящий комплекс, образованный различными комбинациями 4-х субъединиц - GluR 1-4 (Hollmann and Heinemann, 1994) или, согласно современной номенклатуре GluAl-4 (Collingridge et al., 2009; Traynelis et al., 2010). Исследования рекомбинантных АМРА рецепторов показало, что их биофизические и фармакологические свойства з

3.2.1. Влияние (3-карболина абекарнила на активность ГАМКА рецепторов ГАМКА рецепторы центральных нейронов являются мишенью действия многих фармакологических препаратов, используемых в клинической практике, включая анестетики, барбитураты и анксиолитики. Наиболее широко используемыми анксиолитическими как диазепам. препаратами являются бензодиазепины, такие, Бензодиазепины осуществляют эффекты, связываясь с бензодиазепиновым сайтом ГАМКА рецептора и аллостерически модулируя ответы на ГАМ

3.2.2. Модуляция ГАМКА рецепторов ионами меди и цинка Медь является одним из важнейших незаменимых элементов, многих необходимых для живых организмов. Она входит в состав ферментов, таких как цитохромоксидаза, тирозиназа, аскорбиназа и др. Медь присутствует в системе антиоксидантной защиты организма, являясь кофактором фермента супероксиддисмутазы, участвующей в нейтрализации свободных радикалов кислорода. Показано, что ионы меди играют важную роль в нормальном функционировании мо

3.2.4. Модуляция ГАМКА рецепторов нестероидными противовоспалительными средствами из группы фенаматов Данный раздел диссертационной работы в значительной мере является продолжением изложенных выше исследований, направленных на изучение механизмов действия канальных блокаторов ГАМКА рецепторов. С целью изучения связи между строением препарата и его способностью блокировать пору ГАМКА рецептора мы исследовали эффекты нифлумовой кислоты, которая имеет черты структурного сходства с фуросемидом (

Среди лиганд-управляемых каналов, экспрессирующихся в центральных нейронах, ионотропные пуринорецепторы (Р2Х) изучены в наименьшей степени. Хотя данные иммуногистохимических исследований свидетельствуют о том, что эти рецепторы широко экспрессируются в центральных нейронах, их функциональная роль, а также биофизические и фармакологические свойства остаются малоизученными. Несмотря на то, что экспрессию рецепторов наблюдают в разных структурах мозга, вызываемые аппликацией АТФ токи только в в

3.3.1. Фармакологические свойства пуринорецепторов Рекомбинантные гомомерные Р2Х(1-7) рецепторы имеют разную аффинность к агонистам (Khakh et al., 2001). Агонист, более действенный (величина ЕС5о), чем АТФ, для рекомбинантных гомомерных Р2Х1, Р2ХЗ и гетеромерных Р2Х2/3 пуринорецепторов - бета-метилен-АТФ (alpha beta methylene-ATP - оф-meATP) - в концентрации до 300 мкМ не вызывал никаких токов в ТМ нейронах (п=3), что указывает на отсутствие рецепторов с таким субъединичным составом в ТМ ней