Низкая цена
Всего 249a за скачивание одной диссертации
Скидки
75 диссертаций за 4900a по акции. Подробнее
О проекте

Электронная библиотека диссертаций — нашли диссертацию, посмотрели оглавление или любые страницы за 3 рубля за страницу, пополнили баланс и скачали диссертацию.

Я впервые на сайте

Отзывы о нас

Специфичность метилирования ДНК растений при различных физиологических состояниях : диссертация ... кандидата биологических наук : 03.00.03

Год: 2006

Номер работы: 71637

Автор:

Стоимость работы: 249 e

Без учета скидки. Вы получаете файл формата pdf

Оглавление и несколько страниц
Бесплатно

Вы получаете первые страницы диссертации в формате txt

Читать онлайн
постранично
Платно

Просмотр 1 страницы = 3 руб



Оглавление диссертации:

3. Получение трансгенных растений Nicotiana tabacum, содержащих модифицированный ген NLS-M'^coRII

3.1.3. Анализ метилирования ДНК трансформированных клеток человека НК293, экснрессирующих модифицированный ген NLS-M'£'coRII-GFP

3.2. Нсследование метилирования ДЬЖ растений Mesembryanthemum crystallinum в стрессовых условиях IV. ВЫВОДЫ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 80 89 90 73 61 56 <г СОКРАЩЕНИЯ НУК - нафтилуксусная кислота п.н.

- пара нуклеотидов т.п.н.

- тысяча пар нуклеотидов

До открытия эндонуклеаз рестрикции и разработки методов геномного секвенирования анализ метилированных носледовательностей ДНК эукариот проводился с помощью различных энзиматических и химических методов специфической деградации ДНК. Эти методы позволяли специфически расщеплять ДЬЖ до коротких олигонуклеотидов и анализировать главным образом дии тринуклеотидные последовательности. Анализ ДНК различных растений и животных с помощью таких методов показал, что основное количество 5-метилцитозина

1.2.1. Первичная структура цитознн(С5)-ДНК-метилтрансфераз Цитозин(С5)-Д1Ж-метилтрансферазы - класс ферментов, катализирующих перенос метильной группы с <5-аденозилметионина (SAM) на остатки цитозина в специфических последовательностях дуплексной ДНК с образованием 5-метилцитозина и .^-аденозилгомоцистеина (SAH). Эта реакция необратима. Сравнительный анализ первичных структур нрокариотических и эукариотических ДНК-метилаз показывает, что практически все они имеют сходную структуру белко

1.2.2. Эукариотические ДНК-метил азы Эукариотические ДНК-метилазы осуществляют метилирование цитозина в полуметнлированной ренлицирующейся ДНК в симметричных последовательностях CpG и CpNpG, что представляет нолуконсервативный тип наследования картины метилирования родительской ДНК (поддерживающее метилирование), а также de novo метилирование, то есть метилирование полпостью неметилированных последовательностей. Однако уже первые работы с препаратами эукариотических ДНК-метилаз показали

На основе анализа аминокислотных последовательностей, растительные ДНК-метилазы могут быть разделены на 3 семейства: МЕТ1, СМТЗ (хромометилаза) и DRM [Finnegan, Ко vac, 2000]. Семейство метилтрансфераз METI. Ферменты первого семейства сходны с растительных ферментами основным структурно-функционально семейства' DNMT1 млекопитающих. Как и для DNMT1, субстратом для ферментов семейства METI являются полуметилированные динуклеотиды CpG, а основной их функцией является копирование картин

1.2.3. Регуляция экспрессии ДНК-метилазиых геиов В связи с участием метилирования ДНК в переключении различных генетических программ клетки, должны существовать и механизмы регуляции экспрессии самих ДНК-метилазных генов. Исследование этих механизмов находится пока на начальной стадии, прш1ем в большей степени изучена регуляция экспрессии генов dnmtl мыши и человека. Отмечена скоординированная транскрипция генов ДНК-метилаз dnmtl, dnmt3a и dnmt3b в нормальных тканях человека, однако она нар

В ядрах эукариотических организмов Д1Ж содержится в хроматине, высокоорганизованном нуклеопротеидном комплексе, в составе которого упаковка (компактизация) ДНК достигает 10000 раз. Ограничение доступности ДНК для различных ДНК-связывающих белков является следствием упаковки ДНК в структуру хроматина. В связи с этим инициация транскрипции на нуклеосомах репрессирована как in vitro [Paranjape et al., 1994; Knezetic et al., 1986; Lorch et al., 1987] так и in vivo [Han and Grunstein, 1988]. Дл

Эпигенетическое "замолкание" чужеродных генов, введенных в растения, формулирует нерешенную проблему для трансгенных технологий. Явление "замолкания" генов наблюдается с вероятностью до 30% среди независимых генетических трансформантов растений и описано также для других трансгенных организмов [Vaucheret et al., 1998]. Процесс "замолкания" генов зависит от существования трансгенов или от присутствия у трансгенов новторяюшихся копий и собственных генов гомо

1.3.3. Роль метилирования ДНК в развитии растеиий Изучение периодически активных транспозонных элементов кукурузы. Ас и Spm, свидетельствует о том, что метилирование играет важную роль в регуляции активности этих элементов [Banks et al, 1988; Fedoroff et al., 1989; Schwartz, Dennis, 1986]. Первое свидетельство, что метилирование ДНК может регулировать развитие растения, появилось в работе по молекулярным основам яровизации, где индукция цветения является следствием длительного воздействия н

Экспрессия некоторых генов высших эукариотических организмов зависит от их родительского происхождения. Это явление получило название геномного импринтинга. Геномным импринтингом называют процесс, при котором экспрессия гена зависит от того, на каком аллеле, отцовском шш материнском, он расположен. Как правило, различные аллели импринтных генов различаются по таким признакам, как метилирование ДНК, структура хроматина (с различной модификацией гистонов и гиперчувствительностью к ДНКазам), вре

2.1.1. Оборудование В работе использовалось следующее оборудование: центрифуга настольная Eppendorf 5415С (США), ультрацентрифуга Beckman L3-50, центрифуга Beckman J2-21, термомиксер Eppendorf 5436 (США), УФтрансиллюминатор LKB 2011 Macrovue (Швеция), прибор для горизонтального электрофореза Pharmacia GNA-100 (Швеция), источники питания LKB 2197 и 2301 (Швеция), сцинтилляционный счетчик радиоактивности Beckman LS 6800 (США), счетчик радиоактивности (настольный) Minimonitor tml25

2.1.2. Реактнвы, среды н ферменты Использовали следующие реактивы отечественного производства (квалификация "х.ч." или "о.с.ч."): хлорид натрия, ацетат натрия, нитрат аммония, нитрат калия, хлорид кальция, сульфат магния, гидрофосфат калия, сульфат марганца, сульфат цинка, сульфат меди, сульфат железа, хлорид кобальта, натрий молибденовокислый, гидроксид натрия, бромид калия, тиосульфат натрия, сульфит натрия, карбонат натрия, борную кислоту, этиловый спирт, изопропи

2.1.3. Бактериальиые штаммы и илазмиды Использованные в работе бактериальные штаммы и векторные плазмиды представлены в таблице 4.

Nicotiana tabacunt В работе использовались растения табака N. tabacum, культивируемые in vitro. Семена стерилизовали в течении 1-2 мин 70%-ным этанолом, затем 40 мин 1%-ным раствором хлорамина Б с последующей трехкратной промывкой в стерильной дистиллированной воде. Таблица 4 Использованные бактернальные штаммы и плазмнды Штамм E.coli XL-1 blue recAX, end Al, gyrA96, thil, hsdKll, Stratagene Cloning supE44, relAl, A (lac-proAB), FproAB, Systems Maniatis et.al., 1989 Wood, 1966 Bourbonni